[發(fā)明專利]檢測巨細(xì)胞病毒UL54和UL97基因耐藥突變的巢式PCR引物和方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210198789.0
• 申請日: 2022-03-02
• 公開（公告）號: CN114410846A
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 丁子軒;陳蘇寧;沈宏杰;解珺丹;姚紅;馬亮;邱橋成;江艾蕊;王曼
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6848;C12Q1/6858;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 南通毅帆知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32386
• 代理人: 孫燁

1.一種用于巢式PCR方法檢測巨細(xì)胞病毒的引物組，其特征在于，包括長引物組、短引物組和通用測序引物組；

所述長引物組的核苷酸序列選自以下任意一組：SEQ ID NO:1-2或SEQ ID NO:3-4；

所述短引物組的核苷酸序列選自以下任意一組：SEQ ID NO:5-6、SEQ ID NO:7-8、SEQID NO:9-10、SEQ ID NO:11-12、SEQ ID NO:13-14、SEQ ID NO:15-16、SEQ ID NO:17-18、SEQ ID NO:19-20、SEQ ID NO:21-22、SEQ ID NO:23-24、SEQ ID NO:25-26、SEQ ID NO:27-28、SEQ ID NO:29-30、SEQ ID NO:31-32或SEQ ID NO:33-34；

所述通用測序引物組的核苷酸序列如SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36所示。

2.一種檢測巨細(xì)胞病毒的方法，其特征在于，采用巢式PCR方法，所述巢式PCR方法中利用如權(quán)利要求1所述的引物組。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法包括：

S1：獲得DNA樣品；

S2：進(jìn)行第一輪PCR；

S3：進(jìn)行第二輪PCR；

S4：第二輪PCR產(chǎn)物消化后進(jìn)行測序反應(yīng)。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在S2中 ，將CMV反應(yīng)混合液A、引物組和Taq酶混合后置于PCR儀中，運行程序進(jìn)行第一輪PCR。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，在S2和S3中，PCR程序為：（1）95℃，4-6分鐘；（2）95℃，20-40秒；（3）55-57℃，20-40秒；（4）72℃，1-2分鐘；（5）重復(fù)步驟（2）-（4）20-30次；（6）72℃，2-4分鐘；（7）維持4℃。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在S2和S3中，將CMV反應(yīng)混合液A、引物組和Taq酶混合后置于PCR儀中，運行程序進(jìn)行第一輪PCR和第二輪PCR。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在S4中，在第二輪PCR產(chǎn)物中加入蝦堿酶進(jìn)行消化。

8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在S4中，使用通用測序引物組進(jìn)行測序反應(yīng)。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于巢式PCR方法檢測巨細(xì)胞病毒的引物組或權(quán)利要求2-8任一項所述的方法在病毒和/或藥物領(lǐng)域中的應(yīng)用。