[發明專利]一種鼠抗NDM型碳青霉烯酶雜交瘤細胞株，單克隆抗體及應用

在審

• 申請號: 202210194930.X
• 申請日: 2022-03-02
• 公開（公告）號: CN114316056A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 李可可;苑慶華;何永勝;陳曉玲;王亞苗;孔迪;王思怡;張燕;趙芷萌;周躍輝
• 申請（專利權）人: 天津一瑞生物科技股份有限公司;北京金山川科技發展有限公司;天津喜諾生物醫藥有限公司
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;C12N5/20;C12N15/13;G01N33/573
• 代理公司: 天津諾德知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 12213
• 代理人: 欒志超;王旭

本發明提供鼠抗NDM型碳青霉烯酶雜交瘤細胞株，單克隆抗體及應用，通過小鼠雜交瘤單克隆抗體篩選及RT?PCR法克隆Ig可變區基因，獲得穩定分泌鼠抗NDM型碳青霉烯酶抗體的雜交瘤細胞株及其可變區序列；通過系統性評價，鼠抗NDM型碳青霉烯酶抗體在各方面均有較佳表現，效價達到了1:1280000以上，適合作為免疫診斷試劑用于制備碳青霉烯酶耐藥菌株體外診斷試劑盒。

技術領域

本發明屬于抗體制備技術領域，尤其是涉及一種鼠抗NDM型碳青霉烯酶雜交瘤細胞株，單克隆抗體及應用。

背景技術

碳青霉烯類抗生素是控制臨床致病菌感染最有效的藥物之一，產碳青霉烯酶生物（CPO）和耐碳青霉烯腸桿菌因其廣譜耐藥性成為了一個全球公共衛生問題，患者的治療方法非常有限。碳青霉烯酶是指能夠明顯水解至少亞胺培南或美羅培南的一類β-內酰胺酶，包括Ambler分子結構分類的A、B、D三類酶，其中，B類為金屬β-內酰胺酶（IMP型、VIM型、NDM型等），簡稱金屬酶，主要見于銅綠假單孢菌、不動桿菌、腸桿菌科細菌；A、D類為絲氨酸酶，A類酶（KPC型等）主要見于腸桿菌科細菌；D類酶（OXA型）主要見于不動桿菌。

自2008年首次在一位曾在印度旅游的瑞典籍患者體內分離的一株肺炎克雷伯菌中發現以來，NDM便以驚人的速度在世界范圍內播散流行。到目前為止，NDM已在歐洲數十個國家、北美洲的美國、加拿大及墨西哥，亞洲的中國、日本、韓國及新加坡等國家出現。在印度、巴基斯坦等國家，NDM更是引起了流行，其檢出率達38.5％。

實驗室檢測碳青霉烯酶的方法眾多。主要包括改良Hodge試驗、Carba NP試驗、改良碳青霉烯滅活試驗（modified carbapenem inactivation method，mCIM）、酶抑制劑增強試驗、免疫金標試驗以及分子生物學方法等。免疫診斷試劑是體外診斷試劑中發展最快的細分領域，利用抗原與抗體之間的特異性結合進行定性或定量檢測。碳青霉烯酶快速診斷產品對于耐藥菌株的早期分型、指導用藥具有突出作用，對碳青霉烯酶快速診斷產品的研發依然迫在眉睫。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明提供一種鼠抗NDM型碳青霉烯酶雜交瘤細胞株，單克隆抗體及應用。

本發明采用的技術方案是：一種鼠抗NDM型碳青霉烯酶雜交瘤細胞株，命名為1GH10，保藏編號為CGMCC No.21963；或者命名為12HE11，保藏編號為CGMCC No.21964。

一種鼠抗NDM型碳青霉烯酶抗體，抗體1GH10，包括輕鏈可變區和重鏈可變區，輕鏈可變區包括如SEQ ID NO:1所示的CDRL1、SEQ ID NO:2所示的CDRL2和SEQ ID NO:3所示的CDRL3，重鏈可變區包括如SEQ ID NO:4所示的CDRH1、SEQ ID NO:5所示的CDRH2和SEQ IDNO:6所示的CDRH3；

SEQ ID NO:1 RSSQSIVHSDGNTYLD（CDRL1）

SEQ ID NO:2 KVSNRFS（CDRL2）

SEQ ID NO:3 FQISRVPFT（CDRL3）

SEQ ID NO:4 GYAFSNYLIE（CDRH1）

SEQ ID NO:5 VINPGRDDTNYNEKFKG（CDRH2）

SEQ ID NO:6 FPSILRYDSGSFSYFGLDC（CDRH3）

或者，

抗體12HE11，輕鏈可變區包括如SEQ ID NO:11所示的CDRL1、SEQ ID NO:12所示的CDRL2和SEQ ID NO:13所示的CDRL3，重鏈可變區包括如SEQ ID NO:14所示的CDRH1、SEQ IDNO:15所示的CDRH2和SEQ ID NO:16所示的CDRH3；

SEQ ID NO:11 SASSSVSYLH（CDRL1）

SEQ ID NO:12 DTSKLSS（CDRL2）