[發明專利]石龍芮體細胞胚介導的遺傳轉化方法

在審

• 申請號: 202210193136.3
• 申請日: 2019-09-19
• 公開（公告）號: CN114561421A
• 公開（公告）日: 2022-05-31
• 發明（設計）人: 徐克東;李成偉;張怡;張菊;李曉麗;常云霞;于德水
• 申請（專利權）人: 周口師范學院
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H4/00;A01H5/00;A01H6/72
• 代理公司: 北京法信智言知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11737
• 代理人: 尹超群

1.石龍芮體細胞胚介導的遺傳轉化方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)將石龍芮種子消毒，播于無菌苗培養基中，進行無菌苗培養；

(2)選擇無菌苗的營養器官為外植體，在轉化侵染介質中進行農桿菌轉化介質侵染；

(3)將侵染后的外植體平鋪于共培養培養基中進行共培養；

(4)將共培養后的外植體轉入含有抗生素的體細胞胚誘導培養基中進行體細胞胚的誘導發生以及抗性體細胞胚的篩選，其中，體細胞胚誘導培養基包括以下組分：MS鹽、B5有機、10.0mg/L NAA、30g/L蔗糖、7.8g/L瓊脂粉，體細胞胚誘導培養基的pH為5.8；

(5)將抗性體細胞胚置于生根培養基中，于光照條件下誘導胚體生根，其中，生根培養基包括以下組分：1/2MS鹽、1/2B5有機、0.1mg/L NAA、15g/L蔗糖、7.8g/L瓊脂粉，生根培養基的pH為5.8；

(6)煉苗、移栽。

2.根據權利要求1所述的石龍芮體細胞胚介導的遺傳轉化方法，其特征在于，步驟(2)中，所述轉化侵染介質包括以下組分：MS鹽、B5有機、15g/L葡萄糖，轉化侵染介質的pH為5.8。

3.根據權利要求1所述的石龍芮體細胞胚介導的遺傳轉化方法，其特征在于，步驟(3)中，共培養培養基包括以下組分：MS鹽、B5有機、40mg/L乙酰丁香酮、30g/L蔗糖、7.8g/L瓊脂粉，共培養培養基的pH為5.8。

4.根據權利要求1所述的石龍芮體細胞胚介導的遺傳轉化方法，其特征在于，步驟(4)中，體細胞胚誘導培養基含有100mg/L硫酸卡那霉素和500mg/L羧芐青霉素鈉。

5.根據權利要求1所述的石龍芮體細胞胚介導的遺傳轉化方法，其特征在于，步驟(5)中，將抗性體細胞胚置于25℃，16h光照/8h黑暗，光照度為120μmol.m^-2s^-1條件下誘導生根。