[發明專利]OsBEE1基因在提高水稻產量中的應用

有效

• 申請號: 202210192351.1
• 申請日: 2022-02-28
• 公開（公告）號: CN114540369B
• 公開（公告）日: 2023-07-14
• 發明（設計）人: 陳震;韓迎春;李俊周;趙全志;杜彥修;孫紅正;張靜;彭廷
• 申請（專利權）人: 河南農業大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/84;C12N15/113;A01H5/10;A01H6/46
• 代理公司: 鄭州大通專利商標代理有限公司 41111
• 代理人: 張立強

1.OsBEE1基因在提高水稻產量中的應用，其特征在于，敲除水稻的OsBEE1基因增加粒寬，提高水稻的粒重；所述OsBEE1基因的核苷酸編碼序列如SEQ?ID?NO:1所示。

2.敲除OsBEE1基因的株系在提高水稻產量中的應用，其特征在于，使用敲除OsBEE1基因的株系增加水稻的粒寬，提高水稻的粒重；所述OsBEE1基因的核苷酸編碼序列如SEQ?IDNO:1所示。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述敲除OsBEE1基因的株系為OsBEE1基因缺失純合體。

4.敲除OsBEE1基因的試劑盒在提高水稻產量中的應用，其特征在于，敲除OsBEE1基因的試劑盒中包含以OsBEE1基因為靶點的CRISPR/Cas9-gRNA表達載體；所述OsBEE1基因的核苷酸編碼序列如SEQ?ID?NO:1所示。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，使用敲除OsBEE1基因的試劑盒增加水稻的粒寬、提高水稻的粒重。

6.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述gRNA的靶點序列為5′-ACACCACTCTCTCCTCCTCAAGG-?3′，PAM序列為3′端AGG。

7.根據權利要求2或6所述的應用，其特征在于，敲除OsBEE1基因的方法，包括如下步驟：

（1）gRNA靶點序列的選擇：

選擇的靶點序列為5′-?ACACCACTCTCTCCTCCTCAAGG-?3′，所述PAM序列為3′端AGG；

（2）gRNA寡核苷酸鏈上下游引物的設計：

上游引物為BEE1_gRNA_F:?5′-?GGCGACACCACTCTCTCCTCCTCA-3′，

下游引物為BEE1_gRNA_R:?5′-?AAACTGAGGAGGAGAGAGTGGTGT-3′；

（3）gRNA表達載體構建：

將gRNA寡核苷酸鏈上下游引物混合、退火，得寡核苷酸雙鏈DNA；用內切酶BsaI酶切CRISPR/Cas9質粒，得線性質粒；用T4連接酶將所述線性質粒和寡核苷酸雙鏈DNA連接，得連接產物；將連接產物轉化、篩選、驗證，即得CRISPR/Cas9-gRNA表達載體；

（4）將CRISPR/Cas9-gRNA表達載體導入農桿菌中，得CRISPR/Cas9-gRNA農桿菌；用CRISPR/Cas9-gRNA農桿菌侵染水稻愈傷組織；

（5）將步驟（4）獲得的愈傷組織誘導得到再生苗，篩選得到轉基因陽性植株，鑒定即得水稻OsBEE1突變體。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，選擇所述水稻OsBEE1突變體中的純合突變體用于提高水稻產量。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，選擇T0代雙等位突變體自交得T1代，從包括T1代的后繼世代中選擇純合突變體用于提高水稻產量。