[發(fā)明專利]豬偽狂犬病病毒gE/gI/TK基因缺失疫苗株及其構建方法和應用

在審

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• 申請日: 2022-02-25
• 公開（公告）號: CN114657151A
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發(fā)明（設計）人: 伍建敏;李中圣;王鳳求;龐旋飛;王貴平;尹興強
• 申請（專利權）人: 廣東海大畜牧獸醫(yī)研究院有限公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N7/00;C07K16/08;C12N15/38;C12N15/54;A61K39/245;A61P31/22;C12Q1/70;C12R1/93
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 林德強

本發(fā)明公開了一種豬偽狂犬病病毒gE/gI/TK基因缺失疫苗株及其構建方法和應用，所述缺失株是在豬偽狂犬病毒PRV GD0304的基礎上，通過基因工程方法缺失gE、gI和TK基因得到的；所述基因缺失株的保藏編號為CCTCC NO:V201955。相比于經(jīng)典的Bartha K61毒株，針對變異毒株均有較好的攻毒保護效果，可以有效降低發(fā)病率和死亡率，血清中和效價也更高。本三基因缺失毒株在針對偽狂犬變異毒株的防控上有較高的應用和商業(yè)價值，是一株有希望應用于當前PRV流行防控工作的疫苗株。

技術領域

本發(fā)明屬于病毒領域，具體涉及一種豬偽狂犬病病毒gE/gI/TK基因缺失疫苗株及其構建方法和應用。

背景技術

偽狂犬病毒屬于α皰疹病毒，能感染多種哺乳動物和少數(shù)禽類，豬是偽狂犬病毒的主要宿主，偽狂犬病毒會引起妊娠母豬流產(chǎn)、死胎，公豬不育，新生仔豬死亡，育肥豬呼吸困難、生長停滯等偽狂犬病癥狀，是危害養(yǎng)殖業(yè)的重大傳染病之一。目前偽狂犬病的防治主要依賴疫苗，其中最為經(jīng)典，也是目前國內(nèi)外使用最廣泛的是來源于1961年匈牙利學者Bartha分離的K61傳代致弱株，簡稱Bartha K61株。以該毒株為基礎的疫苗在偽狂犬病的防控上發(fā)揮了十分重要的作用，部分國家和區(qū)域?qū)崿F(xiàn)了偽狂犬病的凈化，目前國內(nèi)使用的偽狂犬病毒疫苗也主要來源于該毒株。Bartha K61毒株在中國的偽狂犬病防控上也發(fā)揮了重要作用，1990年以來，有超過80％的養(yǎng)殖豬只免疫了該毒株，有效控制了偽狂犬病在中國的傳播。但是近幾年國內(nèi)流行的偽狂犬毒株可能出現(xiàn)了變異，導致Bartha K61疫苗免疫失敗。從基因序列分析來看，全球偽狂犬病毒可以分為兩個大的分支，其中以Bartha株為代表的基因1型毒株主要分布在歐美，而國內(nèi)的毒株屬于基因2型，位于另一個大的分支上；國內(nèi)毒株又可以進一步分為以Ea毒株為代表的經(jīng)典毒株分支和近年出現(xiàn)的變異毒株分支。從基因分析數(shù)據(jù)也可以看出，雖然偽狂犬病毒還屬于一個血清型，但國內(nèi)外的偽狂犬毒株已經(jīng)出現(xiàn)了基因序列上的分化，國內(nèi)毒株則進一步分化為新舊兩個分支，提示國內(nèi)的毒株在免疫原性上與以Bartha為代表的國外毒株可能已經(jīng)出現(xiàn)了差異，也解釋了近年國內(nèi)出現(xiàn)Bartha株疫苗保護不完全的情況。

另一方面，部分豬場出于生物安全防控的考慮，為了減少人員和豬群的接觸、避免對豬群的刺激，會大大減少疫苗的使用，這也導致這兩年偽狂犬病的發(fā)病率進一步提高。這兩方面的因素，都對偽狂犬疫苗的研制工作提出了更高的要求和挑戰(zhàn)，一方面需要疫苗株能提供針對國內(nèi)流行變異毒株的高效的保護作用，要解決這個問題，需要篩選出國內(nèi)流行的，有代表性的，毒力較強的PRV變異野毒株作為疫苗候選毒株；另一方面則需要更加穩(wěn)定、安全、可靠，免疫效率更高，使用方便，對豬群刺激小的偽狂犬疫苗，這方面則需要通過更加安全可靠的基因缺失疫苗構建、篩選方法，以及對免疫劑型和免疫方式的調(diào)整來實現(xiàn)。

綜上所述，目前國內(nèi)偽狂犬毒株流行和凈化的趨勢，一方面十分需要針對流行偽狂犬變異株的疫苗，另一個方面對疫苗候選毒株的篩選和基因缺失疫苗的構建都提出了更高的要求。而目前國內(nèi)偽狂犬疫苗的毒株主要是傳統(tǒng)的Bartha-K61株疫苗，新疫苗毒株的安全性，有效性，以及是否有地域流行毒株的針對性還未得到市場充分的驗證。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種基于豬偽狂犬病毒PRV GD0304的豬偽狂犬病毒gE/gI/TK基因缺失株及其在制備疫苗中的應用。

本發(fā)明所采取的技術方案是：

本發(fā)明的第一方面，提供一株豬偽狂犬病毒gE/gI/TK基因缺失株，所述豬偽狂犬病病毒gE/gI/TK基因缺失株是gE、gI和TK基因缺失的豬偽狂犬病毒PRV GD0304；；所述豬偽狂犬病PRV GD0304的保藏編號為CCTCC NO:V201946，保藏時間為：2019.8.15，保藏單位：中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址：中國.武漢.武漢大學。