[發明專利]一種提高佐夫色綠藻異養生產蝦青素的細胞預培養方法

有效

• 申請號: 202210189385.5
• 申請日: 2022-03-01
• 公開（公告）號: CN114317277B
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發明（設計）人: 牟海津;孫翰;付曉丹;朱琳
• 申請（專利權）人: 南京益纖生物科技有限公司;威海迪普森生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12P23/00;C12R1/89
• 代理公司: 南京求真專利代理事務所(普通合伙) 32600
• 代理人: 劉騏鳴

1.一種提高佐夫色綠藻異養生產蝦青素的細胞預培養方法，其特征在于：包括如下過程：

預培養處理，將處于對數生長期的佐夫色綠藻進行混養，持續培養三批保持細胞活性，混養的培養基為：KNO₃ 2.02 g/L，NaH₂PO₄·H₂O 0.62 g/L，Na₂HPO₄·2H₂O 0.089 g/L，MgSO₄·7H₂O 0.247 g/L，CaCl₂·2H₂O 14.7 mg/L，FeSO₄·7H₂O 6.95 mg/L，H₃BO₃ 0.061mg/L，MnSO₄·H₂O 0.169 mg/L，ZnSO₄·7H₂O 0.287 mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.0025 mg/L，(NH₄)₆MO₇O₂₄·4H₂O 0.01235 mg/L，5 g/L葡萄糖，pH為6.5；

發酵處理，將預培養處理中不同細胞活性混養的佐夫色綠藻接入三角瓶中進行異養培養，篩選適合異養高密度發酵的佐夫色綠藻細胞狀態，異養培養采用的培養基組成為：KNO₃2.02 g/L，NaH₂PO₄·H₂O 0.62 g/L，Na₂HPO₄·2H₂O 0.089 g/L，MgSO₄·7H₂O 0.247 g/L，CaCl₂·2H₂O 14.7 mg/L，FeSO₄·7H₂O 6.95 mg/L，H₃BO₃ 0.061 mg/L，MnSO₄·H₂O 0.169mg/L，ZnSO₄·7H₂O 0.287 mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.0025 mg/L，(NH₄)₆MO₇O₂₄·4H₂O 0.01235mg/L，5 g/L葡萄糖，pH為6.5；其中，在微藻的生長過程中進行營養的動態補料，補料基于以下公式：

（1）；

其中，F_S為流加的底物濃度，Y_XS為生物量比上底物濃度，當培養基中營養濃度保持不變時，公式（1）轉換成：

（2）；

為了流加操作的方便，將體積轉化成流加的計量指標，則公式（2）轉換成：

（3）；

其中，V_FS為流加速率，單位為mL·h^-1，V₀是初始培養體積，單位為mL，C_FS是流加培養基中營養的濃度，最終得到補料模型V_FS= 0.006204×exp（0.03t）；

補料培養基的組成為葡萄糖400 g/L、硝酸鉀97.6 g/L、磷酸二氫鉀13.1 g/L和其他營養成分，其他營養成分為所述異養培養采用的培養基中除去KNO₃后其他組分濃度濃縮80倍；

擴培處理，將篩選的適合異養高密度發酵的佐夫色綠藻細胞接入發酵罐中進行高密度發酵。