[發(fā)明專利]檢測SARS-CoV-2病毒中和抗體的磁微粒化學(xué)發(fā)光試劑盒及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210184487.8
• 申請日: 2021-06-18
• 公開（公告）號: CN114509571A
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 覃喜建;湯雙雙
• 申請（專利權(quán)）人: 南京金斯瑞生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/58;G01N21/76
• 代理公司: 北京華睿卓成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11436
• 代理人: 程淼;唐莉

本發(fā)明涉及抗體檢測領(lǐng)域，具體涉及檢測SARS?CoV?2病毒中和抗體磁微粒化學(xué)發(fā)光試劑盒及其應(yīng)用，所述試劑盒包括新型冠狀病毒的刺突蛋白部分和特異性結(jié)合所述新型冠狀病毒刺突蛋白部分的ACE2蛋白或其功能片段；其中，所述新型冠狀病毒的刺突蛋白部分連接標(biāo)記物，所述ACE2蛋白或其功能片段連接磁微粒；或所述新型冠狀病毒的刺突蛋白部分連接磁微粒，所述ACE2蛋白或其功能片段連接標(biāo)記物。本發(fā)明的磁微粒化學(xué)發(fā)光試劑盒能用于生物樣品中中和抗體的篩選和鑒定、評價疫苗的有效性以及對受試者樣本中針對SARS?CoV?2病毒中和抗體進(jìn)行定性或定量檢測。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及抗體檢測領(lǐng)域，具體涉及通過SARS-CoV-2病毒中和抗體抑制或阻斷磁微粒化學(xué)發(fā)光的技術(shù)檢測SARS-CoV-2病毒中和抗體的方法以及檢測SARS-CoV-2病毒中和抗體的磁微粒化學(xué)發(fā)光試劑盒。

背景技術(shù)

新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)病原體SARS-CoV-2病毒，又稱2019新型冠狀病毒(2019Novel coronavirus，2019-nCoV)，是一種RNA冠狀病毒。SARS-CoV-2病毒通過跨膜刺突糖蛋白(S蛋白)RBD結(jié)構(gòu)域與宿主細(xì)胞表面ACE2受體結(jié)合進(jìn)入宿主細(xì)胞。 SARS-CoV-2病毒中和抗體通過阻斷SARS-CoV-2 RBD蛋白與ACE2受體結(jié)合抑制SARS- CoV-2病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞。研究表明，在新型冠狀病毒肺炎患者治療過程中，康復(fù)期病人血漿治療取得了較好的療效，顯示出中和抗體在新冠病毒肺炎治療方面的潛力。

目前中和抗體的檢測方法有基于傳統(tǒng)中和實驗(NT)的檢測方法和阻斷ELISA檢測方法。 NT法是將抗體樣品與病毒作用后感染細(xì)胞，通過觀察細(xì)胞病變情況并采用細(xì)胞培養(yǎng)半數(shù)感染量(CCID50)或半數(shù)組織細(xì)胞感染劑量(TCID50)方法計算病毒效價，進(jìn)而評估中和抗體對病毒感染的阻斷能力。中和抗體阻斷ELISA方法是利用標(biāo)記的中和抗體阻斷樣本中的中和抗體與包被在酶標(biāo)板上的病毒或重組抗原結(jié)合，進(jìn)行化學(xué)酶聯(lián)顯色，再用酶標(biāo)分析儀獲得結(jié)果，進(jìn)而評估中和抗體的中和效果。但在實際應(yīng)用中，NT法實驗周期較長，工作量大，難于滿足快速、高通量的篩選需求。中和抗體阻斷ELISA方法需要制備中和抗體，困難較大。

磁性微粒化學(xué)發(fā)光分析法是將磁分離技術(shù)、免疫分析技術(shù)及化學(xué)發(fā)光檢測技術(shù)三者有效結(jié)合在一起的新型的分析檢測技術(shù)。該技術(shù)以微米級磁微粒標(biāo)記抗體蛋白等生物分子捕獲樣本中的目標(biāo)蛋白。該技術(shù)用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)作為標(biāo)記物直接標(biāo)記抗體蛋白等生物分子，或是以能催化化學(xué)發(fā)光物質(zhì)的酶作為標(biāo)記物，產(chǎn)生檢測信號。在反應(yīng)后，化學(xué)發(fā)光物質(zhì)在相應(yīng)的氧化劑或催化酶存在的環(huán)境下，產(chǎn)生可被化學(xué)發(fā)光儀檢測到的光子信號，實現(xiàn)對待測抗體蛋白復(fù)合物的準(zhǔn)確定性或定量測定。磁性微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析法中最常用的標(biāo)記物有堿性磷酸酶(AP)、吖啶酯、辣根過氧化物酶(HRP)等。由于，磁微粒化學(xué)發(fā)光技術(shù)具有高靈敏度、強(qiáng)特異性、磁分離系統(tǒng)的快速分離、檢測時間短、線性范圍寬、以及易實現(xiàn)自動化等優(yōu)點。近年來被廣泛應(yīng)用于臨床診斷、生物醫(yī)學(xué)、食品安全檢測等多個方面。

目前尚沒有發(fā)現(xiàn)用磁微粒標(biāo)記SARS-CoV-2 RBD蛋白(或ACE2受體)和標(biāo)記物偶聯(lián)ACE2受體(SARS-CoV-2 RBD蛋白)的磁性微粒化學(xué)發(fā)光分析法檢測SARS-CoV-2病毒中和抗體的報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明利用SARS-CoV-2病毒中和抗體能夠阻斷SARS-CoV-2 RBD蛋白與ACE2受體結(jié)合的特性開發(fā)了檢測SARS-CoV-2病毒中和抗體化學(xué)發(fā)光試劑盒。該試劑盒可以通用，操作簡便，使用成本低，更易推廣應(yīng)用。