[發明專利]一種產巖藻糖基乳糖的基因工程菌及生產方法

在審

• 申請號: 202210184191.6
• 申請日: 2022-02-22
• 公開（公告）號: CN114480240A
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 張濤;李夢麗;江波;李晨晨;胡苗苗
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12N15/53;C12N15/54;C12N15/56;C12N15/57;C12N15/60;C12N15/61;C12P19/00;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 仇鈺瑩

1.一種基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌敲除了β-半乳糖苷酶基因lacZ、UDP-葡萄糖脂質載體轉移酶基因wcaJ、GDP-甘露糖甘露糖基水解酶基因nudD、GDP-甘露糖水解酶基因nudK、6-磷酸果糖激酶-1基因pfkA、6-磷酸果糖激酶-2基因pfkB、甘露醇-1-磷酸脫氫酶基因mtlD、蛋白酶基因lon、果糖-6-磷酸醛縮酶A基因fsaA、果糖-6-磷酸醛縮酶B基因fsaB和巖藻糖異構酶/墨角藻糖激酶FucI-FucK基因簇中的一種或多種基因，并表達了磷酸甘露糖變位酶基因manB、甘露糖-1-磷酸鳥嘌呤基轉移酶基因manC、GDP-甘露糖-6-脫氫酶基因gmd，GDP-巖藻糖合成酶基因wcaG。

2.根據權利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌中還表達來源于大腸桿菌O126的α-1,2巖藻糖基轉移酶基因、來源于幽門螺桿菌ATCC 26695的α-1,2巖藻糖基轉移酶基因或來源于幽門螺桿菌NCTC 11639的α-1,3巖藻糖基轉移酶基因。

3.根據權利要求2所述的基因工程菌，其特征在于，所述編碼磷酸甘露糖變位酶基因manB、甘露糖-1-磷酸鳥嘌呤基轉移酶基因manC、GDP-甘露糖-6-脫氫酶基因gmd和GDP-巖藻糖合成酶基因wcaG均來源于大腸桿菌K12 MG655。

4.根據權利要求3所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌利用pRSFDuet-1、pETDuet-1、pCDFDuet-1、pACYCDuet-1或pCOLADuet-1載體過表達基因manB、manC、gmd、wcaG、HpfutC和/或M32。

5.根據權利要求4所述的基因工程菌，其特征在于，利用載體pRSFDuet-1表達manB、manC、gmd和wcaG，利用pETDuet-1表達HpfutC或M32。

6.根據權利要求1～5所述的基因工程菌，其特征在于，以大腸桿菌為宿主。

7.一種生產巖藻糖基乳糖的方法，其特征在于，以甘油為碳源，以0.1～1.0mM IPTG為誘導劑，利用權利要求1～6任一所述的基因工程菌在乳糖存在的條件下發酵生產巖藻糖基乳糖，所述甘油在發酵體系中的濃度為10～30g/L。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，將權利要求1～6任一所述基因工程菌在發酵體系中培養至OD₆₀₀為0.6±0.1，加入終濃度為0.2～0.3mM的IPTG及終濃度為5～10g/L的乳糖，在20～30℃下培養不少于70h。

9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，將權利要求1～6任一所述基因工程菌在發酵體系中培養至OD₆₀₀為20±3，加入終濃度為0.1～0.3mM的IPTG及終濃度為5～15g/L的乳糖，在20～30℃誘導培養，維持發酵體系中的溶氧為20～50％，pH為6.5～7.0。

10.權利要求1～6任一所述基因工程菌在生產巖藻糖基乳糖及含有巖藻糖基乳糖的產品中的應用。