[發(fā)明專利]一種用于制備抗水稻AGO16蛋白抗體的多肽及制備方法和應用

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• 申請日: 2022-02-25
• 公開（公告）號: CN114437210A
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發(fā)明（設計）人: 武亮;毋霞
• 申請（專利權）人: 海南浙江大學研究院
• 主分類號: C07K16/16
• 分類號: C07K16/16;C07K16/06;C07K14/415;C07K14/795;G01N33/68
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

本發(fā)明涉及一種用于制備抗水稻AGO16蛋白抗體的多肽及制備方法和應用，屬于基因工程技術領域。本發(fā)明提供了一種多肽在制備抗水稻AGO16蛋白的抗體中的應用，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本發(fā)明所述應用獲得的抗體效價高、親和力強、特異性好，可與天然水稻AGO16發(fā)生特異性結合反應；制備成本低；純化后的抗體可用于免疫印跡和免疫沉淀。本發(fā)明抗體也可用于分析AGO16蛋白結合sRNA的特征，為進一步解析AGO16蛋白的生物學功能提供依據(jù)。

技術領域

本發(fā)明涉及基因工程技術領域，具體涉及一種用于制備抗水稻AGO16蛋白抗體的多肽及制備方法和應用。

背景技術

基因沉默是真核生物中一種高保守、序列特異的基因表達調(diào)控方式。根據(jù)作用靶標，可將其分為兩類：以RNA為靶標，使其降解或抑制蛋白翻譯，稱為轉(zhuǎn)錄后水平基因沉默(post-transcriptional gene silencing，PTGS)；以染色質(zhì)為靶標，使其DNA或組蛋白甲基化從而抑制RNA轉(zhuǎn)錄的起始，稱為轉(zhuǎn)錄水平基因沉默(transcriptional gene silencing，TGS)。

基因沉默中最重要的組成部分是小分子RNA(small RNA，sRNA)和Argonaute(AGO)蛋白，各類sRNA通過與AGO蛋白結合，進而形成RNA沉默復合物(RNA-Induced SilencingComplexes，RISCs)，并遵循堿基互補配對原則識別靶標位點。AGO作為RISCs的關鍵組成部分，對小分子RNA的招募和發(fā)揮作用必不可少。AGO蛋白大約有100kDa，主要具有三個結構域：PAZ、Mid和PIWI。PAZ結構域可以特異識別并結合小分子單鏈RNA3’端核苷酸；Mid結構域有一個深穴，特異結合磷酸化的5’末端來固定RNA；PIWI結構具有外切酶活性，可以切割RNA底物，是AGO蛋白剪切催化的活性中心。植物AGO蛋白根據(jù)其序列同源性可分為三個亞家族：AGO1亞家族、AGO7亞家族和AGO4亞家族。

AGO16屬于AGO4蛋白亞家族，可作為RISCs的核心組分參與轉(zhuǎn)錄水平基因沉默：RNA介導的DNA甲基化(RNA-directed DNAmethylation，RdDM)。但目前并沒有用于檢測AGO16的產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種用于制備抗水稻AGO16蛋白抗體的多肽及制備方法和應用。本發(fā)明提供的多肽制備得到的抗水稻AGO16蛋白抗體能夠?qū)崿F(xiàn)水稻AGO16蛋白的檢測，可用于分析與AGO16結合的sRNA，進一步解析AGO16生物學功能，也可用于分析AGO16互作蛋白，深入解析RISCs組分。

本發(fā)明提供了一種多肽在制備抗水稻AGO16蛋白的抗體中的應用，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

優(yōu)選的是，所述多肽包括修飾后的多肽，所述修飾包括N端修飾或載體蛋白修飾。

優(yōu)選的是，所述N端修飾為在多肽N端增加一個半胱氨酸殘基。

優(yōu)選的是，所述載體蛋白修飾為將多肽與載體蛋白進行偶聯(lián)，所述載體蛋白包括匙孔血藍蛋白。

本發(fā)明還提供了一種用于制備抗水稻AGO16蛋白的抗體的多肽，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本發(fā)明還提供了一種用于制備抗水稻AGO16蛋白的抗體的偶聯(lián)復合物，所述偶聯(lián)復合物由氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的多肽與載體蛋白偶聯(lián)獲得。

優(yōu)選的是，所述載體蛋白包括匙孔血藍蛋白。

本發(fā)明還提供了一種抗水稻AGO16蛋白的抗體的制備方法，包括以下步驟：合成氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽，將所述多肽進行N端修飾，得到氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示的N端修飾多肽，將所述N端修飾多肽與載體蛋白交聯(lián)，免疫動物，取免疫的動物的血制備抗血清，對血清進行分離純化，得到抗體。