[發明專利]抗大口黑鱸虹彩病毒LMBV的單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 202210174632.4
• 申請日: 2022-02-25
• 公開（公告）號: CN114230660B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發明（設計）人: 黃曉紅;黃友華;張澤妙;秦啟偉;楊家輝
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;C12N5/20;G01N33/569;G01N33/577
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

本發明公開了抗大口黑鱸虹彩病毒LMBV的單克隆抗體及其應用。雜交瘤細胞株LMBV?MCP?8B10 2G6，其于2021年12月28日保藏于中國典型培養物保藏中心（CCTCC），地址：湖北省武漢市武昌區八一路299號，郵編：430072，保藏編號為：CCTCC NO：C202208。抗大口黑鱸虹彩病毒LMBV的單克隆抗體是由雜交瘤細胞株LMBV?MCP?8B10 2G6產生。本發明中LMBV MCP的單抗的成功制備為LMBV免疫學檢測方法的建立、抗病毒免疫制劑、病毒感染致病機理的研究奠定了基礎，也可用于對LMBV MCP在體內外的定量和定位分析。

技術領域

本發明屬于免疫學和病毒學交叉技術領域，具體涉及一種具有能特異識別病毒主要衣殼蛋白的抗大口黑鱸虹彩病毒LMBV的單克隆抗體及其應用。

背景技術

大口黑鱸又名加州鱸，是一種淡水魚類，屬鱸形目，鱸亞目，太陽魚科，黑鱸屬，是我國近年來養殖規模發展最為迅速的品種之一。據《中國漁業統計年鑒》統計的數據，2020年全國鱸魚總產量達到61.95萬噸，已成為我國第十大淡水魚類養殖品種。但隨著養殖規模的擴大、養殖密度的增加、養殖模式的單一化及養殖環境的惡化，鱸魚的病害問題日益凸顯。其疾病主要包括病毒性疾病、細菌性疾病、寄生蟲性疾病和真菌性疾病。 其中病毒性病原中，虹彩病毒和彈狀病毒是最重要的兩種病原。大口黑鱸虹彩病毒（Largemouth bassvirus，LMBV）是一種胞質型雙鏈DNA病毒，屬于虹彩病毒科蛙病毒屬。LMBV感染加州鱸引起的典型癥狀為：昏睡、體內外出血和臟器腫大等。LMBV主要感染仔魚和幼魚，導致死亡率超過80%，是加州鱸養成過程中最重要的病毒性病原，造成重大的經濟損失。

目前對于大口黑鱸虹彩病毒尚缺乏有效的治療方法和防控措施，早期檢測和診斷是預防該病疾病爆發的關鍵環節。利用特異性強的單克隆抗體開發針對大口黑鱸虹彩病毒的檢測技術，不僅具有快速、靈敏的優點，也適合現場大規模檢測應用。另外，制備的單克隆抗體還可應用于病毒感染致病的研究中，包括病毒基因在宿主體內或體外培養細胞中的表達、定位、抗病毒功能制品篩選及病毒感染致病機理等。主要衣殼蛋白（major capsidprotein，MCP）不僅是虹彩病毒的核心基因，也是病毒的主要結構蛋白。通常利用病毒的MCP序列同源性可以對病毒進行分類和檢測。盡管國內已經制備了多種魚類病毒或病毒蛋白的單克隆抗體，但是尚未有大口黑鱸虹彩病毒MCP單克隆抗體制備及應用的相關文獻與專利。因此，抗大口黑鱸虹彩病毒MCP單克隆抗體亟待研制。

發明內容

本發明的第一個目的是提供能產生抗大口黑鱸虹彩病毒LMBV的單克隆抗體的雜交瘤細胞株LMBV-MCP-8B10 2G6 ，其于2021年12月28日保藏于中國典型培養物保藏中心（CCTCC），地址：湖北省武漢市武昌區八一路299號，郵編：430072，保藏編號為：CCTCC NO：C202208。

本發明的第二個目的是提供一種抗大口黑鱸虹彩病毒LMBV的單克隆抗體，其是由雜交瘤細胞株LMBV-MCP-8B10 2G6 產生。

本發明的第三個目的是提供上述抗大口黑鱸虹彩病毒LMBV的單克隆抗體在制備檢測大口黑鱸虹彩病毒LMBV MCP蛋白抗原試劑中的應用。

優選，是抗大口黑鱸虹彩病毒LMBV的單克隆抗體在制備檢測大口黑鱸虹彩病毒LMBV試劑中的應用。

優選，是抗大口黑鱸虹彩病毒LMBV的單克隆抗體在用于體外感染細胞中MCP的定位的試劑中的應用。

優選，所述的試劑可以是膠體金免疫試劑盒、化學發光試劑盒、放射免疫試劑盒、酶聯免疫試劑盒或熒光免疫試劑盒。

本發明的第四個目的是提供一種檢測虹彩病毒LMBV MCP蛋白抗原試劑，其含有抗大口黑鱸虹彩病毒LMBV的單克隆抗體。