[發明專利]一種Ⅱ型膠原蛋白肽多糖去除的方法

在審

• 申請號: 202210174282.1
• 申請日: 2022-02-25
• 公開（公告）號: CN114457138A
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發明（設計）人: 劉建華;邵天倫;李夢雨;崔蓬勃;唐煒;于明曉;宋彥卓
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K14/78;C07K1/34
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 黎雙華

1.一種Ⅱ型膠原蛋白肽多糖去除的方法，其特征在于，包括步驟：

（1）原料預處理：選取提取完硫酸軟骨素的動物軟骨，粉碎，然后進行脫脂、脫雜蛋白、脫鈣處理；

（2）制備酶解液：將步驟（1）向預處理得到的動物軟骨中加入蛋白酶酶解2-6h后經滅酶、離心，得到酶解液；

（3）多糖降解：向步驟（2）得到的酶解液中加入輔助降解劑并進行超聲波處理，得到降解液；

（4）超濾脫糖：選取5-10kDa分子量的超濾膜對步驟（3）得到的降解液進行過濾，收集濾出液，得到Ⅱ型膠原蛋白肽溶液。

2.根據權利可要求1所述的一種Ⅱ型膠原蛋白肽多糖去除的方法，其特征在于，步驟（3）中所述輔助降解劑與所述酶解液的體積比為1-2.5:25；所述輔助降解劑為過氧化氫、乙醇中的一種或兩者的復配物。

3.根據權利可要求2所述的一種Ⅱ型膠原蛋白肽多糖去除的方法，其特征在于，步驟（3）中超聲波處理條件為：超聲波頻率20-80kHz、溫度30-60℃、時間0.5-3h。

4.根據權利可要求1所述的一種Ⅱ型膠原蛋白肽多糖去除的方法，其特征在于，步驟（4）中所述濾出液的流速為2-4ml/min。

5.根據權利可要求1所述的一種Ⅱ型膠原蛋白肽多糖去除的方法，其特征在于，步驟（2）中所述蛋白酶與動物軟骨的質量比為0.01-0.1：1。

6.根據權利可要求5所述的一種Ⅱ型膠原蛋白肽多糖去除的方法，其特征在于，步驟（2）中所述蛋白酶包括堿性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶。

7.根據權利可要求1所述的一種Ⅱ型膠原蛋白肽多糖去除的方法，其特征在于，步驟（1）中脫脂處理包括：采用乙醚溶液浸泡12-24h，然后加熱直至乙醚完全揮發。

8.根據權利可要求1所述的一種Ⅱ型膠原蛋白肽多糖去除的方法，其特征在于，步驟（1）中脫雜蛋白處理包括：在0-10℃下加入NaOH溶液浸泡并磁力攪拌3-12h，并且每2-3h更換一次NaOH溶液。

9.根據權利可要求1所述的一種Ⅱ型膠原蛋白肽多糖去除的方法，其特征在于，步驟（1）中脫鈣處理采用EDTA脫鈣溶液，所述EDTA脫鈣溶液與動物軟骨的體積比為4-10:1。