[發明專利]一種具有美白活性成分煙籽油的制備方法及美白活性評價方法及應用

有效

• 申請號: 202210172734.2
• 申請日: 2022-02-24
• 公開（公告）號: CN114774195B
• 公開（公告）日: 2023-09-26
• 發明（設計）人: 古吉;鄭昀曄;張立猛;牛永志;宋碧清
• 申請（專利權）人: 玉溪中煙種子有限責任公司
• 主分類號: A61K8/92
• 分類號: A61K8/92;C11B9/02;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72
• 代理公司: 成都市鼎宏恒業知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 51248
• 代理人: 段和香

1.一種具有美白活性成分煙籽油的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

（1）原料選取：采集成熟的煙草蒴果，晾曬至煙草蒴果干燥；將煙草蒴果進行脫粒后風選獲得飽滿煙草籽，將所述飽滿煙草籽洗凈后干燥至含水率降至8%～10%，備用；

（2）將步驟（1）中干燥后的飽滿煙草籽經研磨后進行熱壓榨，獲得熱壓榨后的煙籽初油,?所述熱壓榨為將飽滿煙草籽研磨至粒度為45-55目后，在195-205℃下進行壓榨；

（3）將步驟（2）中的煙籽初油靜置18-24h后進行過濾，獲得過濾后的煙籽初油；

（4）將步驟（3）中過濾后的煙籽初油中加入生物吸附劑，置于恒溫搖床中振蕩吸附反應6-8h,?所述生物吸附劑為酵母粉末，所述酵母粉末與煙籽初油的質量比為1:20；

（5）待步驟（4）反應結束后，用微孔濾膜分離過濾除去生物吸附劑，獲得煙籽油半成品；

（6）將步驟（5）中的煙籽油半成品放入分子蒸餾儀中，在85-90℃、100?Pa條件下進行第一次分子蒸餾，冷凝后獲到第一餾分為一級輕組分的煙籽油L1；將第一次蒸餾剩余物在95-100℃、10?Pa條件下繼續進行第二次分子蒸餾，冷凝得到的第二餾分為二級輕組分的煙籽油L2；將第二次蒸餾剩余物在115-120℃、1?Pa條件下繼續進行三級分子蒸餾，冷凝后獲得第三餾分為三級輕組分的煙籽油L3；

（7）將步驟（6）中的煙籽油L1、煙籽油L2和煙籽油L3合并，即獲得具有美白活性成分的煙籽油。

2.根據權利要求1中所述的具有美白活性成分煙籽油的制備方法，其特征在于：步驟（5）中所述微孔濾膜的孔徑為0.32μm。

3.根據權利要求1中所述的具有美白活性成分煙籽油的制備方法，其特征在于：步驟（6）中所述分子蒸餾儀的進料速度為50mL/h，轉子轉速為120r/min。

4.一種煙籽油的美白活性評價方法，其特征在于：包括以下步驟：

S1：將權利要求1-3任一項所述的具有美白活性成分的煙籽油進行GC-MS檢測，檢測出所述具有美白活性成分煙籽油中的脂肪酸含量和揮發性成分含量；

S2：以熊果苷為陽性對照，測定熊果苷對B16黑色素瘤細胞的抑制率及對B16黑色素瘤細胞內黑色素合成的抑制率；

S3：測定煙籽油對B16黑色素瘤細胞的抑制率及對B16黑色素瘤細胞內黑色素合成的抑制率；

S4：將步驟S2中熊果苷對B16黑色素瘤細胞的抑制率與步驟S3中煙籽油對B16黑色素瘤細胞的抑制率進行對比，將步驟S2中熊果苷對B16黑色素瘤細胞內黑色素合成的抑制率與步驟S3中煙籽油對B16黑色素瘤細胞內黑色素合成的抑制率進行對比，確定煙籽油的美白活性能力；

S5：結合步驟S4中確定的煙籽油美白活性能力、步驟S1中的煙籽油脂肪酸含量和揮發性成分含量，對煙籽油的美白活性能力進行綜合評價。

5.根據權利要求4中所述的煙籽油的美白活性評價方法，其特征在于：步驟S1中所述脂肪酸含量的GC-MS檢測條件為：

GC檢測條件：進樣口溫度240℃；載氣為99.999%高純氦氣，流速為1?mL/min，不分流進樣；色譜柱型號為HP-5的30m×0.32mm×0.25μm石英毛細管柱，程序升溫條件：柱溫箱初始溫度40℃，然后以1℃/min的速度增加到80℃；再以20℃/min的速率增加到250℃，保持10min；

MS檢測條件：離子源為EI源，電子能量70eV，接口溫度250℃，離子源溫度230℃，質量掃描范圍30-540m/z，溶劑延遲3min，全掃描模式。

6.根據權利要求4中所述的煙籽油的美白活性評價方法，其特征在于：步驟S2中所述熊果苷對B16黑色素瘤細胞的抑制率的測定方法與步驟S3中煙籽油對B16黑色素瘤細胞的抑制率的測定方法均為：將B16黑色素瘤細胞經培養后棄上清液，得細胞懸液；將細胞懸液中加入不同體積分數的煙籽油或熊果苷；培養不同時間后，加入MTT繼續培養，棄上清液，加入DMSO震蕩，測定490nm吸光值，根據吸光值計算細胞抑制率。