[發明專利]一種秀珍菇RNA病毒檢測引物組及檢測方法

有效

• 申請號: 202210171296.8
• 申請日: 2022-02-24
• 公開（公告）號: CN114438264B
• 公開（公告）日: 2023-07-21
• 發明（設計）人: 劉新銳;鄧優錦;陳炳智;吳小平
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/92
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 林文弘;蔡學俊

1.一種秀珍菇RNA病毒的檢測引物組，其特征在于：所述檢測引物組選自以下引物組Plp_vir1或引物組Plp_vir2：

引物組Plp_vir1：

正向引物序列：5'-TTTCCGATCAGGCCAATGAG-3'，

反向引物序列：5'-CCGCAGTTCCAGCCAAATAG-3'；

引物組Plp_vir2：

正向引物序列：5’-CCAACGCTTTGTCCGCATTC-3’，

反向引物序列：5’-ATGACGCCATATCCAAGTCC-3’。

2.一種秀珍菇RNA病毒的檢測方法，其特征在于：首先提取待測秀珍菇樣品的總RNA，通過反轉錄成cDNA，然后以反轉錄的cDNA為模板，以權利要求1所述的檢測引物組作為引物進行RT-PCR擴增，凝膠電泳檢測擴增產物，并對電泳結果進行判斷，確定待測秀珍菇樣品是否攜帶RNA病毒。

3.根據權利要求2所述的秀珍菇RNA病毒的檢測方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）提取待測秀珍菇樣品的總RNA；

（2）將步驟（1）提取的秀珍菇總RNA反轉錄成cDNA；

（3）以步驟（2）所得cDNA為模板，建立秀珍菇RNA病毒的RT-PCR檢測；

PCR擴增體系總體積25μl：cDNA模板1.5～3μl，Premix?Taq?12.5μl?，10?μmol/L正向引物1μl，10?μmol/L反向引物1μl，ddH₂O?7.5～9μl；

PCR擴增反應程序：94℃預變性5min；98℃變性10sec，56℃退火30sec，72?℃延伸45sec,?30～35個循環；72?℃延伸10min；

根據凝膠電泳檢測的DNA圖譜，若用引物組Plp_vir1擴增出563?bp的特異DNA條帶，或用引物組Plp_vir2擴增出521?bp的特異DNA條帶，則表示待測秀珍菇樣品攜帶RNA病毒，若采用引物組Plp_vir1和引物組Plp_vir2均未擴增出特異DNA條帶，則表示待測秀珍菇樣品不攜帶RNA病毒。