[發明專利]一種子癇前期疾病動物模型及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 202210171224.3
• 申請日: 2022-02-24
• 公開（公告）號: CN114451358B
• 公開（公告）日: 2023-03-10
• 發明（設計）人: 顧蔚蓉;王誠潔;裴江南;劉真真;李明清
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬婦產科醫院
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;A01K67/027;A61K48/00;A61K49/00;A61P15/00
• 代理公司: 杭州奧創知識產權代理有限公司 33272
• 代理人: 趙梅

本發明公開了一種子癇前期疾病動物模型，以Sirt1^+/?全身敲除雜合子孕鼠為子癇前期疾病動物模型。本發明還公開了其構建方法和應用。本發明子癇前期疾病動物模型無需外界藥物和術式干預，繁殖無需特殊飼料和特殊飼養環境，但又能比較完整還原子癇前期疾病發生，可用于幫助闡明子癇前期疾病的發病過程及機制，還可用于幫助防治子癇前期疾病藥物篩選和藥效評價。

技術領域

本發明涉及動物模型構建技術領域，具體涉及一種子癇前期疾病動物模型及其構建方法和應用。

背景技術

子癇前期(Preeclampsia，PE)是妊娠期特有的多系統進展性疾病，主要表現為妊娠后半期或產后新發高血壓和蛋白尿；或新發高血壓和顯著終末器官功能障礙，伴或不伴尿蛋白。常導致母兒不良妊娠結局及增加遠期心血管疾病的發生風險，目前病因不明，尚無有效治療手段。但因分娩后臨床癥狀會消退，最新指南歸因于胎盤及母體血管功能障礙。

理想的動物模型，應呈現疾病的臨床特征。PE因特發于妊娠中晚期，表現為滋養層細胞浸潤不足、螺旋動脈重鑄障礙，伴發高血壓、彌漫性血管內皮功能損傷，并進一步導致腎臟損傷、尿蛋白，及其他終末器官功能障礙。因致病因素未明，而全身累及病征較廣，目前已知的模型均不能完全呈現PE的所有癥狀。目前常用的大鼠、小鼠模型有脂多糖誘導的炎癥模型、RUPP術式減少子宮-胎盤灌注壓的血管收縮模型，以及可溶性fms樣酪氨酸激酶1等誘導的抗血管生成模型等，往往只聚焦于血壓和尿蛋白體征，并不能較好還原病程，也無法兼顧滋養細胞侵襲障礙和子癇前期特有的腎臟等終末臟器功能障礙，無法還原疾病的臨床特征。且造模成本較高，操作較為繁瑣，無論是藥物劑量還是手術方式，都存在實驗操作者的個體差異，進而影響造模成功率。

Sirt1是一種尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD⁺)依賴的蛋白去乙酰化酶，是Sir2蛋白在哺乳動物中的同源體，屬于哺乳動物Sirtuins蛋白家族。目前的研究認為Sirt1在細胞核和細胞質中均有分布。Sirt1通過使多種蛋白質的賴氨酸殘基發生去乙酰化而發揮抗炎、抗氧化應激、抗衰老、激活T細胞免疫甚至線粒體產生等作用。

針對上述模式動物高昂的造模成本，繁瑣的造模過程，以及不能完全復原的病理生理過程這一系列技術問題，本發明提供了一種新的動物模型，Sirt1^+/-全身敲除雜合子狀態下即可還原疾病病理生理過程，解除妊娠狀態或使用激動劑治療可以恢復。此外，無需外界藥物和術式干預，繁殖無需特殊飼料和特殊飼養環境，為子癇前期發病過程及機制的研究提供了全新的動物模型。

發明內容

本發明的目的是提供一種子癇前期疾病動物模型及其構建方法和應用，以解決現有技術的不足。

本發明采用以下技術方案：

本發明第一方面提供了Sirt1基因在構建子癇前期疾病動物模型中的應用。

本發明第二方面提供了一種子癇前期疾病動物模型，以Sirt1^+/-全身敲除雜合子孕鼠為子癇前期疾病動物模型。

進一步地，所述Sirt1^+/-全身敲除雜合子孕鼠由如下步驟獲得：將Sirt1^flox/flox基因編輯小鼠擴繁后與Dppa3-IRES-Cre小鼠雜交，并經由去Cre繁育。

本發明第三方面提供了一種子癇前期疾病動物模型的構建方法，包括如下步驟：將Sirt1^flox/flox基因編輯小鼠擴繁后與Dppa3-IRES-Cre小鼠雜交，并經由去Cre繁育后，獲得Sirt1^+/-全身敲除雜合子孕鼠即為構建的子癇前期疾病動物模型。

本發明第四方面提供了所述子癇前期疾病動物模型在研究子癇前期疾病的發病過程及機制中的應用。

本發明第五方面提供了所述子癇前期疾病動物模型在防治子癇前期疾病藥物篩選和藥效評價中的應用。