[發明專利]一種皮膚生物打印墨水及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202210167711.2
• 申請日: 2022-02-23
• 公開（公告）號: CN114540275B
• 公開（公告）日: 2023-06-13
• 發明（設計）人: 劉婧;張偉;張敏;馮沖;李謹
• 申請（專利權）人: 合肥學院
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 合肥市浩智運專利代理事務所(普通合伙) 34124
• 代理人: 繆璐歡

1.采用皮膚生物打印墨水制備全層皮膚模型的方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)將海藻酸鈉粉末和明膠粉末置于紫外燈下照射后，加入DMEM完全培養基，溶解后消毒，得到海藻酸鈉和明膠混合物；

(2)將培養后的真皮層細胞用胰蛋白酶消化，用層粘連蛋白溶液懸浮細胞，然后加入海藻酸鈉和明膠混合物，形成含真皮層細胞的生物打印墨水,該打印墨水中海藻酸鈉、明膠、層粘連蛋白及真皮層細胞的最終濃度為：1％(w/v)，5％(w/v)，50μg/ml和5×10⁶/ml；

(3)待含真皮層細胞生物打印墨水冷卻成膠后置于3D打印機料筒中，設置真皮層打印模型，擠出墨水進行打印，形成真皮層模型；

所述真皮層模型包括第一墨水層、第二墨水層、第三墨水層和第四墨水層，所述第一墨水層、第二墨水層、第三墨水層依次層疊，所述第四墨水層將第一墨水層、第二墨水層、第三墨水層圍合，所述第二墨水層和第三墨水層之間形成多個開口逐漸增大的漏斗狀空間；

(4)將打印好的真皮層模型交聯成膠，清洗后置于多孔支架上，然后將支架置于培養皿中，在第三墨水層上表面鋪上100μg/ml的層粘連蛋白溶液，然后置于培養箱中孵育后，再鋪上濃度為2×10⁷/ml的表皮細胞懸浮液，于培養箱中靜置培養后，往培養皿中加入表皮分化培養基直至表皮細胞懸浮液下方，進行氣-液相培養，形成全層皮膚模型。

2.根據權利要求1所述的皮膚生物打印墨水制備全層皮膚模型的方法，其特征在于：所述步驟(4)中將真皮層模型放入質量濃度為2％的氯化鈣水溶液中交聯成膠。

3.根據權利要求1所述的皮膚生物打印墨水制備全層皮膚模型的方法，其特征在于：所述第一墨水層包括橫向和縱向走向的兩層，第一墨水層中線間距為0mm。

4.根據權利要求1所述的皮膚生物打印墨水制備全層皮膚模型的方法，其特征在于：所述第二墨水層包括橫向和縱向走向的兩層，第二墨水層中每層之間的線間距為0.8mm。

5.根據權利要求1所述的皮膚生物打印墨水制備全層皮膚模型的方法，其特征在于：所述第三墨水層包括橫向和縱向走向的兩層，第三墨水層中每層之間的線間距為1.6mm。

6.根據權利要求1所述的皮膚生物打印墨水制備全層皮膚模型的方法，其特征在于：所述多孔支架為不銹鋼網或塑料支架。