[發明專利]一種基于共振能量轉移策略的雙電位比率電化學發光適配體傳感器制備方法及其應用

在審

• 申請號: 202210167427.5
• 申請日: 2022-02-23
• 公開（公告）號: CN114577783A
• 公開（公告）日: 2022-06-03
• 發明（設計）人: 李麗波;江潘奧;由天艷;羅莉君;劉曉紅
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N27/327
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于共振能量轉移策略的雙電位比率電化學發光適配體傳感器制備方法,其特征在于，包括以下步驟：

(1)AuNCs的制備：

首先，稱取氫氧化鈉和6-氮雜-2硫代胸腺嘧混合后用超純水A溶解，得到含NaOH的ATT溶液；然后稱取氯金酸并用超純水B溶解，得到HAuCl₄溶液；將含NaOH的ATT溶液倒入HAuCl₄溶液中，混合均勻后置于黑暗中反應得到黃色溶液；然后將黃色溶液倒入透析袋中透析，最后將透析后的溶液放入真空冷凍機內干燥，干燥后的粉末狀固體即為AuNCs；

(2)PTC-NH₂的制備：

首先，將苝四甲酸二酐溶解在丙酮中，攪拌均勻，得到的紅色混合溶液；然后，將乙二胺加入到上述紅色混合溶液中，攪拌均勻，并置于一定溫度條件下進行反應，反應后，再用無水乙醇進行離心洗滌，將離心洗滌后得到的沉淀進行干燥，得到的產品記為PTC-NH₂；

(3)將玻碳電極用三氧化二鋁粉末打磨、拋光，然后依次在水、乙醇、丙酮和水中超聲清洗并晾干，得到處理后的玻碳電極；然后將步驟(1)制備得到的粉末狀AuNCs溶于超純水中，得到AuNCs溶液；AuNCs溶液修飾到處理后的玻碳電極表面，室溫下晾干，得到的產品標記為AuNCs/GCE；

(4)將Pb²⁺適配體溶液修飾于步驟(3)得到的AuNCs/GCE表面，在一定溫度條件下孵育一段時間后用超純水淋洗，得到的產品標記為Apt/AuNCs/GCE；

(5)將6-巰基己醇溶液修飾于步驟(4)得到的Apt/AuNCs/GCE表面，在室溫條件下反應，再用超純水淋洗，得到的產品標記為MCH/Apt/AuNCs/GCE；

(6)將Pb²⁺適配體的互補DNA溶液修飾于步驟(5)得到的MCH/Apt/AuNCs/GCE表面，在一定溫度條件下反應一段時間，用超純水淋洗，得到的產品標記為cDNA/MCH/Apt/AuNCs/GCE；

(7)將步驟(2)制備得到的PTC-NH₂溶解在超純水中，得到PTC-NH₂溶液；再將PTC-NH₂溶液修飾于步驟(6)得到的cDNA/MCH/Apt/AuNCs/GCE表面，在室溫下反應一段時間后用超純水淋洗，得到的產品標記為PTC-NH₂/cDNA/MCH/Apt/AuNCs/GCE，即為基于共振能量轉移策略的雙電位比率電化學發光適配體傳感器。

2.根據權利要求1所述的一種基于共振能量轉移策略的雙電位比率電化學發光適配體傳感器制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述氫氧化鈉、6-氮雜-2硫代胸腺嘧和超純水A的用量比為0.12g：0.17g：15mL；所述氯金酸和超純水B的用量比為0.15g：15mL；所述含NaOH的ATT溶液與HAuCl₄溶液混合的體積比為1：1；所述置于黑暗中反應時間為1h；所述透析袋的分子截留量為50KDa，透析的時間為24h；所述冷凍干燥的條件為-60℃下干燥72h。

3.根據權利要求1所述的一種基于共振能量轉移策略的雙電位比率電化學發光適配體傳感器制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述苝四甲酸二酐、丙酮和乙二胺的用量比為100mg：10mL：5mL；所述置于一定溫度條件下進行反應的溫度為0-10℃，反應時間為2-10h。

4.根據權利要求1所述的一種基于共振能量轉移策略的雙電位比率電化學發光適配體傳感器制備方法，其特征在于，步驟(3)中，所述玻碳電極的直徑為3mm；所用的三氧化二鋁粉末的粒徑為0.05μm；所述AuNCs溶液的濃度為1mg mL^-1，所述AuNCs溶液修飾的用量為6μL。

5.根據權利要求1所述的一種基于共振能量轉移策略的雙電位比率電化學發光適配體傳感器制備方法，其特征在于，步驟(4)中，所述Pb²⁺適配體溶液的濃度為0.6-1.6μM，所述一定溫度為4℃，所述孵育一段時間為10-12h；所述Pb²⁺適配體溶液修飾的用量為6μL。