[發明專利]一種負載人重組骨形態發生蛋白rhBMP-2的殼聚糖/絲素蛋白海綿

有效

• 申請號: 202210160622.5
• 申請日: 2022-02-22
• 公開（公告）號: CN114524970B
• 公開（公告）日: 2023-09-19
• 發明（設計）人: 曹建新;鄧平
• 申請（專利權）人: 浙江瑞谷生物科技有限公司
• 主分類號: C08J9/28
• 分類號: C08J9/28;C08J3/24;C08L89/00;C08L5/08;C08L5/04;C08B37/08;A61L27/26;A61L27/50;A61L27/54;A61L27/56
• 代理公司: 杭州恒翌專利代理事務所(特殊普通合伙) 33298
• 代理人: 朱旭雷

1.一種負載人重組骨形態發生蛋白rhBMP-2的殼聚糖/絲素蛋白海綿，其特征在于按重量百分比計包括骨形態發生蛋白rhBMP-2凍干粉0.1%~1%、tris緩沖液0.5%~1.5%、海藻糖1%~2%、牛血清白蛋白0.5%~2%、交聯劑0.5%~3%，絲素蛋白3%~10%、殼聚糖2%~5%，余量為水；其中絲素蛋白和殼聚糖的重量百分比為2：1；

所述的交聯劑是京尼平和辣根氧化物酶按2：1混合；并采用如下制備方法制備得到：

（1）絲素蛋白溶液制備：將蠶絲浸入到0.5wt%的碳酸鈉溶液，90~100℃靜置30min，取出固形物用去離子水沖洗，真空干燥箱60℃烘干，得脫膠蠶絲；再將脫膠蠶絲溶解在溶比1：10的三元溶液中，攪拌，得到含有絲素蛋白的混合溶液，再將混合溶液裝入透析袋，使用去離子水室溫環境下進行透析，經過濾得4wt%絲素蛋白溶液，保存備用；

（2）改性殼聚糖制備：將殼聚糖溶于250ml?5%體積醋酸溶液；氬氣保護下，加熱至90℃，加入6ml?0?.08mol/?L硝酸鈰，反應30min；加入9ml?50%質量烯丙基三甲基氯化銨水溶液，反應2h；冷卻，乙醇沉?淀，洗滌，抽濾，真空干燥得烯丙基三甲基氯化銨改性殼聚糖；將烯丙基三甲基氯化銨改性殼聚糖溶于1%醋酸溶液中制備得到2%的烯丙基三甲基氯化銨改性殼聚糖溶液；

（3）在絲素蛋白溶液中加入京尼平攪拌均勻后，依次加入tris緩沖液、海藻糖、牛血清白蛋白，繼續攪拌10min，室溫條件下加入骨形態發生蛋白rhBMP-2凍干粉，攪拌均勻，靜置30min獲得半膠體狀物質；

（4）將改性殼聚糖溶液添加到步驟（3）獲得的半膠體狀物質中，邊攪拌邊加入辣根氧化物酶，再磁力攪拌，1500rpm，30min；然后將獲得的混合乳液倒入容器中，梯度凍干：-20℃靜置12h，而后-80℃靜置6h；最后置于真空凍干機中凍干48h，得負載人重組骨形態發生蛋白rhBMP-2的殼聚糖/絲素蛋白海綿。

2.根據權利要求1所述的負載人重組骨形態發生蛋白rhBMP-2的殼聚糖/絲素蛋白海綿，其特征在于步驟（1）中所述的三元溶液是氯化鈣：乙醇：水按摩爾比1：2：8配置。