[發明專利]一種耐高溫糞腸球菌及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202210159528.8
• 申請日: 2022-02-22
• 公開（公告）號: CN114480206B
• 公開（公告）日: 2022-12-02
• 發明（設計）人: 江國托;劉艷;劉星;劉秋晨;單春喬;劉恩;翟宏旭;徐福利
• 申請（專利權）人: 江蘇三儀生物工程有限公司;大連三儀動物藥品有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N13/00;C12N15/01;C12N1/36;A23K10/18;C12R1/01
• 代理公司: 北京中譽至誠知識產權代理事務所(普通合伙) 11858
• 代理人: 張平力

本發明涉及一種耐高溫糞腸球菌及其制備方法與應用，本發明通過菌種分離、生理生化鑒定、高溫馴化和紫外線誘變處理，篩選得到了一株可耐受高溫的糞腸球菌Q68，于2022年1月5日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO:M 2022020。該菌株具有良好的遺傳穩定性；50℃過夜培養與37℃過夜培養相比，存活率可達91.9％。本發明提供了其發酵方法，可將發酵產物進一步制備為菌劑，作為益生菌添加劑應用于飼料中，具有降低料肉比、降低腹瀉率、生物環保等優點。

技術領域

本發明涉及微生物制劑技術領域，具體涉及一種耐高溫糞腸球菌及其制備方法與應用。

背景技術

飼料藥物添加劑在預防動物疾病、促進動物生長、提高畜禽生產性能等方面作用十分明顯，對保障現代養殖業的健康快速發展和促進人民生活水平的提高作用起到了巨大的推動作用。抗菌藥物作為抗菌促生長劑添加到飼料中迄今已有半個多世紀的歷史了。但對飼料中添加抗菌藥物的合理性的爭論亦已持續了多年，爭論的焦點是其對人體健康的危害和對環境的破壞。

益生菌制劑正是在這種大背景下應運而生的。它可以直接飼喂動物并通過調節動物腸道微生態平衡達到預防和治療疾病，促進動物生長以及提高飼料報酬的活性微生物或其代謝培養物，以達到調整體內微生態平衡之目的。益生菌制劑不僅可以提高飼料轉化率和畜禽的生產性能、防治疾病，并且對改善動物健康狀況，降低畜禽產品中膽固醇的含量有著很好的作用。

糞腸球菌為革蘭氏陽性菌，屬于腸球菌屬，是農業部添加劑目錄允許使用的安全菌種之一，在動物機體內具有保護屏障功效、營養功效、抑菌功效等作用，其在畜禽上的益生作用也得到了廣泛認可。糞腸球菌相較于一般乳酸菌，雖然具有一定的溫度耐受性、不同PH適應性及其他惡劣條件耐受性，但其各方面耐受性并不突出，如50℃僅能存活30分鐘左右，pH低于3.5或高于9幾乎不生長等，因此，篩選到抗逆性較好尤其是溫度耐受性較好的糞腸球菌菌株，對生產應用意義重大。

此外，目前國內市場上銷售的益生菌制劑往往僅以活菌數菌量來衡量益生菌制劑的好壞，但在生產實踐中真實情況卻并非如此。有些廠家生產出來的產品質量不同批次之間差異懸殊，即便活菌數大致相同，在實際應用中也很難取得一致的效果。另外，益生菌制劑在保藏、運輸和在飼料配制過程中的穩定性，也影響其使用的效果，特別是非芽抱桿菌類益生菌制劑。因此，開發新的菌劑制備工藝，以保持菌株穩定的性能，十分必要。

發明內容

本發明的目的在于克服上述現有技術中存在的缺陷，提供一種耐高溫糞腸球菌及其制備方法與應用。

為此，第一方面，本發明提供一種糞腸球菌Q68，其分類命名為糞腸球菌Enterococcus faecalis，于2022年1月5日保藏于中國典型培養物保藏中心(簡稱CCTCC)，地址為中國武漢大學，保藏編號為CCTCC NO:M 2022020。

所述糞腸球菌Q68具有下述性質：在MRS固體平板培養基培養后，其菌落呈乳白色或灰白色，圓形，小而中間凸起，濕潤，邊緣光滑，革蘭氏陽性，在顯微鏡下觀察呈球形或雙球形。

對所述糞腸球菌Q68進行基因組提取，以基因組為模板，進行16S rDNA 的PCR擴增，將測序結果進行同源比對，確定其為糞腸球菌。將篩選得到的該菌株命名為糞腸球菌Q68，經過鑒定，該菌株具有耐高溫性能，50℃過夜培養與37℃過夜培養相比，存活率可達91.9％。

本發明的第二方面，提供所述糞腸球菌Q68的發酵方法，其包括用發酵培養基對所述糞腸球菌Q68進行發酵培養，所述發酵培養基包括：蛋白胨1-5％，葡萄糖1-2％，玉米淀粉1-5％，大豆蛋白胨0.5-1％，氯化鈣0.01-0.05％，氯化鈉0.01-0.05％，氯化鎂0.01-0.05％，磷酸二氫鉀0.05-0.1％。

在一些實施方式中，所述發酵培養基包括：蛋白胨2％，葡萄糖1％，玉米淀粉1％，大豆蛋白胨0.5％，氯化鈣0.05％，氯化鈉0.05％，氯化鎂0.05％，磷酸二氫鉀0.05％。