[發(fā)明專利]一種鴨傳染性漿膜炎防治用噬菌體

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210157640.8
• 申請(qǐng)日: 2022-02-21
• 公開（公告）號(hào): CN114921419A
• 公開（公告）日: 2022-08-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王喜亮;黃金梅;張秀玲;徐岳;田甲;張曉東;金秀娥
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢格瑞農(nóng)生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N7/00
• 分類號(hào): C12N7/00;C12N7/02;A61K35/76;A61P31/04;C12R1/92
• 代理公司: 武漢中知誠(chéng)業(yè)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 42271
• 代理人: 施志勇

1.一種鴨傳染性漿膜炎防治用噬菌體，其特征在于，其能對(duì)鴨疫里氏桿菌發(fā)生裂解作用，所述噬菌體命名為Riemerella anatipestifer phage GRAP2，噬菌體Riemerellaanatipestifer phage GRAP2于2021年11月23日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC M 20211478。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鴨傳染性漿膜炎防治用噬菌體，其特征在于，所述噬菌體以鴨疫里氏桿菌菌株GRA116為宿主分離得到，其屬于長(zhǎng)尾噬菌體，噬菌斑大小為1mm。

3.權(quán)利要求1或2中所述的鴨傳染性漿膜炎防治用噬菌體在鴨疫里氏桿菌所導(dǎo)致的鴨疫里氏桿菌病的預(yù)防和治療中的應(yīng)用。

4.權(quán)利要求1或2所述的鴨傳染性漿膜炎防治用噬菌體的分離和純化方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)采集自山東某肉鴨養(yǎng)殖場(chǎng)附近水樣30份，每份20mL，5000rpm離心10min后取上清液過(guò)濾除菌，濾液與同體積的2×TSB液體培養(yǎng)基(含10％新生牛血清)及1mL處于對(duì)數(shù)期的鴨疫里氏桿菌菌液(10⁷cfu/mL)均勻混合，于5％CO₂培養(yǎng)箱中37℃過(guò)夜培養(yǎng)，富集噬菌體；

(2)將樣本富集液5000rpm離心10min，取上清液過(guò)0.22μm的微孔濾膜除菌得到含有噬菌體的濾液；

(3)取濾液100uL與其宿主鴨疫里氏桿菌菌液500uL均勻混合，靜置15min使其與細(xì)菌表面的受體充分結(jié)合；

(4)將上述混合液加入7mL冷卻至50℃的TSB半固體瓊脂培養(yǎng)基(含5％新生牛血清)，混勻后立即鋪于已凝固的TSA平板上，待瓊脂凝固后于5％CO₂培養(yǎng)箱中37℃倒置培養(yǎng)12-16h，觀察噬菌斑生長(zhǎng)情況；

(5)在形成噬菌斑的雙層平板上，用無(wú)菌槍頭挑取大而透亮的噬菌斑，于1mL SM液中振蕩解吸附后過(guò)0.22μm的微孔濾膜除菌得噬菌體濾液，將其接種于5mL TSB液體培養(yǎng)基(含5％新生牛血清)中，加入100uL相應(yīng)的宿主鴨疫里氏桿菌菌液并混勻，5％CO₂培養(yǎng)箱37℃條件下過(guò)夜培養(yǎng)，5000rpm離心10min取上清后以細(xì)菌濾膜過(guò)濾，采用雙層平板法觀察噬菌斑形態(tài)，重復(fù)操作3-5次后，即可得形狀和大小一致的噬菌斑。