[發明專利]NtNAC083基因在負調控煙草冷脅迫應答中的應用

在審

• 申請號: 202210156602.0
• 申請日: 2022-02-21
• 公開（公告）號: CN114686514A
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 郭永峰;李偉;文利超;張增林;劉濤;鄧智超;張豆豆
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院煙草研究所（中國煙草總公司青州煙草研究所）
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/66;C12N15/29;A01H5/00;A01H6/82
• 代理公司: 青島清泰聯信知識產權代理有限公司 37256
• 代理人: 張潔

1.NtNAC083基因在負調控煙草冷脅迫應答中的應用。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，NtNAC083基因通過調節冷脅迫關鍵基因CBF1或NCED3的表達來負調控煙草對冷脅迫的響應。

3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，NtNAC083基因通過影響丙二醇和離子滲透率來負調控煙草對冷脅迫的耐受性。

4.根據權利要求1-3任一項所述的應用，其特征在于，所述NtNAC083基因的序列如SEQID NO：1所示。

5.根據權利要求1-3任一項所述的應用，其特征在于，所述冷脅迫的條件為4℃下處理30天。

6.提高煙草冷脅迫應答能力的方法，其特征在于，包括以下步驟：

構建煙草基因NtNAC083的過表達載體，經農桿菌介導轉化到煙草中，獲得提高煙草冷脅迫應答能力的轉基因植株。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，構建煙草基因NtNAC083的過表達載體的方法為：

根據NtNAC083全長序列設計以下引物：

NtNAC083-F：CACTGTTGATACATATGGTTGGGAAAATTAGCTCGG；NtNAC083-R：TGTTGATTCAGAATTCTCACTGAAATTGAAAAGCTGGA；

以普通煙草K326 cDNA為模板，利用PrimeSTAR HSDNA高保真酶進行NtNAC083全長序列擴增，使用NEB限制性內切酶NdeI和EcoRI-HF將過表達載體pRI101-AN進行線性化，利用infusion方法將目的基因片段構建到pRI101-AN中，提取重組質粒進行酶切驗證并測序，得到過表達載體。

8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，構建煙草基因NtNAC083的過表達載體后，利用農桿菌介導的葉盤法轉化普通煙草K326，通過對所得轉基因植株的NtNAC083基因表達量分析，得到提高煙草冷脅迫應答能力的轉基因植株NtNAC083-OE。

9.根據權利要求6-8任一項所述的方法，其特征在于，冷脅迫的條件為4℃下處理30天。