[發明專利]一種針對HER3納米抗體的分離純化方法

在審

• 申請號: 202210151493.3
• 申請日: 2022-02-18
• 公開（公告）號: CN114409787A
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發明（設計）人: 李冬冬;訾紅彥
• 申請（專利權）人: 南京英瀚斯生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C07K1/32;C07K1/22;C07K1/18;C07K1/36;C07K1/14
• 代理公司: 北京智行陽光知識產權代理事務所(普通合伙) 11738
• 代理人: 孫麗朋

本發明公開了一種針對HER3納米抗體的分離純化方法，涉及生物化學技術領域。其包括：將預處理后的菌體依次經粗分離處理及蛋白除雜處理后，得到納米抗體，預處理包括對菌體進行破碎處理，菌體表達HER3納米抗體的菌體，蛋白除雜處理包括層析處理。本發明提供的分離純化方法工藝簡單，所用的純化工藝便于操作，普適性廣，且無需依賴昂貴的實驗儀器，成本較低，適合大規模的推廣應用。純化后的針對HER3納米抗體的免疫原性較好。

技術領域

本發明涉及生物化學技術領域，具體而言，涉及一種針對HER3納米抗體的分離純化方法。

背景技術

納米抗體是自然界存在的可與抗原結合的最小片段，稱為VHH抗體。納米抗體性質非常穩定，在高溫條件下仍然保持生物活性，這將徹底解決生物制劑冷鏈運輸和儲存的難題。納米抗體在免疫、診斷、醫學成像、檢測、蛋白質結晶、腫瘤的抗體靶向診斷和治療等領域具有良好的應用前景。

而HER3屬于人類表皮生長因子受體(HER)家族成員，該家族還包括HER1/EGFR/ErbB1、HER2/ErbB2、HER4/ErbB4。盡管在30多年前就已發現了HER3，但迄今為止尚未有任何針對HER3靶點的治療干預措施獲得臨床批準。近年來研究發現，HER3經常與癌細胞中其他受體酪氨酸激酶(RTK)共同表達并形成異二聚體，激活致癌信號通路，特別是PI3K/Akt、MAPK/ERK和JAK/STAT通路和Src激酶。與其他家族成員相比，HER3單獨過表達時不會致癌。但在多種癌癥中都檢測到了HER3表達，包括乳腺癌、卵巢癌、結腸癌、胃癌、肺癌、皮膚癌和胰腺癌，HER3的高表達也與疾病進展和/或預后不良有關。

對HER3潛在機制的研究表明，HER3表達導致EGFR/HER2-TKI耐藥是癌癥治療失敗的主要原因之一。HER3信號的激活也被證明可以促進癌癥轉移。此外，HER3突變的激活也突出了HER3作為直接治療靶點的作用。因此，制備HER3的納米抗體來進行疾病檢測及治療具有廣闊的前景。

目前針對HER3納米抗體的純化存在純化過程繁瑣，成本高。

鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種針對HER3納米抗體的分離純化方法以解決上述技術問題。

本發明是這樣實現的：

本發明提供了一種針對HER3納米抗體的分離純化方法，其包括：將預處理后的菌體依次經粗分離處理及蛋白除雜處理后，得到納米抗體，預處理包括對菌體進行破碎處理，菌體表達HER3納米抗體的菌體，蛋白除雜處理包括層析處理。

現有的納米抗體純化方法過程繁瑣，成本較高，其對于重組表達的針對HER3納米抗體的免疫原性差。

本發明提供的分離純化方法工藝簡單，所用的純化工藝便于操作，普適性廣，且無需依賴昂貴的實驗儀器，成本較低，適合大規模的推廣應用。純化后的針對HER3納米抗體的免疫原性較好。

由上述純化方法獲得的納米抗體能夠與透明質酸特異性結合。

在本發明應用較佳的實施方式中，上述粗分離處理包括沉淀法處理。

通過粗分離處理能夠從預處理后的菌體中初步分離出納米抗體，進而再通過蛋白除雜處理，能夠去除初步分離出的納米抗體中的其他蛋白。本發明提供的納米抗體的分離純化方法，通過合理選擇粗分離處理及蛋白除雜處理作為純化技術，并且確定粗分離處理及蛋白除雜處理的先后順序，從而得到純度大于95％的納米抗體。

本發明對粗分離處理的具體方式不做限定，凡是能夠起到初步分離納米抗體的作用的方法均可；本發明對蛋白除雜處理的具體方式也不做限定，凡是能夠起到去除雜蛋白的作用的方法均可。

在本發明應用較佳的實施方式中，上述沉淀法包括但不限于硫酸銨沉淀法、聚乙二醇沉淀法、丙酮沉淀法、苦味酸沉淀法、磷鎢酸鹽沉淀法或三氯乙酸沉淀法。