[發明專利]一種RIG-I在制備川崎病診斷試劑盒中的應用

在審

• 申請號: 202210151491.4
• 申請日: 2022-02-18
• 公開（公告）號: CN115287343A
• 公開（公告）日: 2022-11-04
• 發明（設計）人: 夏薇薇;陳紅兵;賈占軍;張愛華;吳夢;龍廣鳳;裴知音;桂珍
• 申請（專利權）人: 南京市兒童醫院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851
• 代理公司: 北京卓嵐智財知識產權代理有限公司 11624
• 代理人: 沈煜華

本發明提供了一種RIG?I(維甲酸誘導基因I)在制備川崎病診斷試劑盒中的應用，其特征在于，RIG?I作為檢測指標應用在制備川崎病診斷試劑盒中。本發明為川崎病早期診斷提供了新的方法，本發明試劑盒可通過檢測外周血PBMC中RIG?I基因的表達水平輔助診斷兒童是否患有川崎病；本發明對川崎病患兒的快速診斷有著重要的臨床應用價值，為臨床診斷川崎病提供了技術保障。本發明技術穩健，成本低，適用于生產和臨床使用。

技術領域

本發明涉及醫藥領域，具體涉及RIG-I基因作為生物標志物在制備川崎病診斷試劑盒上的應用。

背景技術

川崎氏病(Kawasaki disease，KD)，又稱為川崎病或黏膜皮膚淋巴腺綜合癥，是一種以全身性血管炎為主要病理改變的急性發熱出疹性疾病。川崎病高發于亞洲地區，多發于5歲以下男性嬰幼兒。主要臨床表現為：發熱、雙眼球結膜充血、口唇潮紅、皸裂、楊梅舌、口腔粘膜彌漫充血、皮疹、手掌腳掌紅斑、指趾端潮紅硬腫、蛻皮、頸部淋巴結腫大。該病可引起以血管炎為中心的全身多器官炎癥損傷，累及心臟。川崎病主要危害心血管系統，可導致冠狀動脈損傷，包括冠狀動脈炎、冠狀動脈擴張、冠狀動脈瘤、冠狀動脈栓塞等，嚴重危害嬰幼兒的健康。目前其診斷主要依靠臨床癥狀，缺乏較好的特異性和敏感性的診斷標志物。

維甲酸誘導基因I(Retinoic acid inducible gene I，RIG-I)，是RIG-I樣受體家族的成員之一。人源rig-i基因定位在9號染色體上，cDNA全長約3kb，能編碼含有925個氨基酸的RIG-I蛋白，主要定位在細胞質中。RIG-I作為一個胞內RNA病毒受體，能夠誘導下游信號通路產生IFN-β，起到抗病毒的功能。RIG-I下游信號通路除了產生IFN-β介導抗病毒，還可以介導炎癥相關細胞因子的產生。

2011年一項研究發現在細胞衰老的過程中高表達的RIG-I激活下游轉錄因子NF-κB和AP-1，進而誘導細胞炎性因子的表達。在炎性疾病動脈粥樣硬化的發生和發展過程中，巨噬細胞中RIG-I的表達活化起到重要的作用。除了衰老和動脈粥樣硬化，研究還發現RIG-I也參與腎小球性腎炎、系統性紅斑狼瘡腎炎(lupus nephritis)和類風濕性關節炎的發生、發展。近幾年有研究發現RIG-I也介導了LPS誘導的膿毒血癥，尤其發現在內皮細胞中LPS能夠誘導RIG-I表達，敲低RIG-I后會顯著減輕LPS導致的內皮細胞損傷。上述研究結果表明RIG-I參與了不同炎性疾病的發生。但是在川崎病中，目前未見任何報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種擴增RIG-I基因的引物及其在制備診斷川崎病試劑盒上的應用，以解決上述背景技術中提出的問題。

本發明通過實時熒光定量PCR方法檢測人外周血PBMC中RIG-I水平，結果發現RIG-I在川崎病患兒外周血PBMC中的表達顯著高于正常兒童。本發明試劑盒可通過檢測外周血PBMC中RIG-I基因的表達水平輔助診斷兒童是否患有川崎病。

為實現上述目的，本發明采用了如下技術方案：

一種RIG-I在制備川崎病診斷試劑盒中的應用，其特征在于，RIG-I作為檢測指標應用在制備川崎病診斷試劑盒中。

所述RIG-I在川崎病診斷試劑盒中的表達通過實時熒光定量PCR方法檢測。

所述RIG-I的引物序列為：

Forward primer：

5’-CTGGACCCTACCTACATCCTG-3’,

Reverse primer：

5’-GGCATCCAAAAAGCCACGG-3’

以及內參基因β-actin的引物序列為：

Forward primer：5’-GAG CTA CGA GCT GCC TGA CG-3‘’；