[發明專利]用于提高生物測定動態范圍的方法

在審

• 申請號: 202210151335.8
• 申請日: 2018-09-06
• 公開（公告）號: CN114518445A
• 公開（公告）日: 2022-05-20
• 發明（設計）人: Y·宋
• 申請（專利權）人: 阿姆普勒斯生物科學公司
• 主分類號: G01N33/48
• 分類號: G01N33/48;G01N33/53;C12Q1/6837
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 張全信

本發明涉及用于提高生物測定動態范圍的方法。提供擴展生物測定諸如免疫測定的范圍的組合物和方法。在一個實施方式中，使用多個離散測試位點。收集指示存在所關注的分析物的測試位點比例的數據和為由離散測試位點群體生成的信號提供統計值的數據。聚集這些數字和統計方法的結果以提供擴展的動態范圍。在另一個實施方式中，以連續方式向單個測試位點或容器提供兩次或更多次試劑添加。此類添加呈現相同樣品的不同稀釋度的不同試劑組，并且允許在單個多重測定中同時表征高豐度分析物和低豐度分析物兩者，同時避免在低樣品稀釋度下觀察到高豐度分析物的高劑量鉤狀效應。可組合這些方法以提供動態范圍的進一步提高。

本申請為分案申請，原申請的申請日為2018年09月06日、申請號為“201811035838.9”、發明名稱為“用于提高生物測定動態范圍的方法”。

本申請要求2017年9月6日提交的美國臨時申請No.62/554,889的權益。這些和所有其它參考外來材料通過引用整體并入本文。當通過引用并入的參考文獻中術語的定義或使用與在本文中提供的術語的定義不一致或相反時，以在本文中提供的此術語的定義為主。

技術領域

本發明的領域是生物測定，特別是免疫測定。

背景技術

背景技術描述包括可用于理解本發明的信息。這并非承認本文所提供的任何信息是現有技術或與當前要求保護的發明相關，或者具體地或隱含地引用的任何出版物是現有技術。

生物測定，諸如免疫測定(例如，EIA、FIA等)、核酸擴增測定(諸如rtPCR、線性擴增測定等)和基于細胞的測定是現代生物研究和臨床實踐的支柱。歷史上，這些生物測定已經通過用分析物特異性試劑處理樣品并且從本體混合物(bulk mixture)獲得信號強度(例如，吸光度、熒光強度、發光強度等)的讀數來進行。將此信號強度與從由用相同試劑處理的類似樣品制備的本體混合物獲得的信號強度的標準或劑量/響應曲線進行比較，以便導出所關注的分析物的濃度。在免疫測定的情況下，此類分析物特異性試劑通常包括與所關注的分析物形成特異性、可檢測的復合物的抗體或抗體片段。此類免疫測定的動態范圍一般限于約兩個數量級。然而，在一些應用中，分析物的濃度范圍可能擴展超出此范圍。類似地，在多重測定中，各分析物的濃度范圍可寬泛地變化。

已經嘗試開發具有擴展的測量或動態范圍的生物測定。例如，Bell的美國專利No.6,551,788描述基于熒光的免疫測定，其中不同尺寸的顆粒被用作初始捕獲相。該專利陳述，大顆粒比小顆粒在低濃度下提供分析物分子的更有效捕獲；遺憾的是，它沒有提供理論框架或數據來支持此斷言。

Goix等人的美國專利申請No.2014/0065722描述某種程度類似的方法，其中不同的顆粒群體與針對相同分析物的低親和力抗體或高親和力抗體偶聯并且被用作捕獲相。分開讀取不同的顆粒群體以產生可用于提供擴展的測量范圍的有區別的劑量/響應曲線。Dowell等人的美國專利申請公開No.2015/0046114描述類似的方法，其中共同捕獲抗體與夾心免疫測定中對分析物具有不同親和力的不同標記抗體組合使用。然而，這些方法需要具有相同特異性和顯著不同親和力的抗體的可用性，這可能不適用于所關注的分析物。

在另一種方法中，已經提出使用并入對所關注的分析物具有不同結合親和力的物理上有區別的區或傳感器的測試裝置。例如，(Campbell等人的)美國專利No.9,671,398描述使用兩種不同的免疫傳感器，一種免疫傳感器被構建用于展示分析物相對于另一種分析物的結合的減弱，以導出提供有效的擴展測量范圍的重疊劑量/響應曲線。然而，此類裝置的構建是復雜的，并且在應用于多重測定時變得越來越復雜。

在Drukier的美國專利No.7604956中描述的另一種方法中，通過系統地減少在其它常規測定中的背景噪聲源來實現擴展的測量范圍。這種背景噪聲的減少有效地增加測定的靈敏度，而不影響高分析物濃度下的測定性能，從而導致動態范圍增加。然而，尚不清楚用于最小化背景噪聲源的方法是否適用于寬范圍的生物測定。另外，由于最小化背景噪聲源的方法對于每種分析物是特定的，所以這種方法似乎不太可能可用于多重測定。