[發明專利]一種基于人多能干細胞構建心臟類器官的方法在審
| 申請號： | 202210150888.1 | 申請日： | 2022-02-18 |
| 公開（公告）號： | CN114438021A | 公開（公告）日： | 2022-05-06 |
| 發明（設計）人： | 吳福建;楊曉菲;李富榮 | 申請（專利權）人： | 深圳市人民醫院 |
| 主分類號： | C12N5/077 | 分類號： | C12N5/077;C12N5/0735 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245 | 代理人： | 白艷 |
| 地址： | 518020 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 多能 干細胞 構建 心臟 器官 方法 | ||
1.一種基于人的多能干細胞構建心臟類器官的方法，包括如下步驟：
1)將離體人的多能干細胞在不進行水凝膠包裹的條件下成球培養，得到人多能干細胞球；
2)將所述人多能干細胞球依次進行第一次分化培養、第二次分化培養和第三次分化培養，即得到心臟類器官；
在所述第一次分化培養和所述第二次分化培養前均包括將待培養細胞水凝膠包裹的步驟；
所述第一次分化培養采用的類器官分化培養基1，包括CHIR99021、B27和L-抗壞血酸-2-磷酸三鈉鹽；
所述第二次分化培養采用的類器官分化培養基2，其包括KY02111、B27和L-抗壞血酸-2-磷酸三鈉鹽；
所述第三次分化培養采用的類器官分化培養基3，其包包括B27和L-抗壞血酸-2-磷酸三鈉。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：
步驟1)中的所述成球培養為將所述離體人的多能干細胞在含有Y27632的細胞培養基中培養，得到干細胞球。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：
所述含有Y27632的細胞培養基由5-10微摩爾Y27632和干細胞培養基組成；
所述培養時間為24小時；
所述離體干細胞的數量為2500-50000個/孔。
4.根據權利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：
所述類器官分化培養基1由5微摩爾CHIR99021、1％B27和550ug/mL L-抗壞血酸-2-磷酸三鈉鹽、細胞基礎培養基組成；
所述類器官分化培養基2由5微摩爾KY02111、1％B27和550ug/mL L-抗壞血酸-2-磷酸三鈉鹽、細胞基礎培養基組成；
所述類器官分化培養基3由1％B27和550ug/mL L-抗壞血酸-2-磷酸三鈉鹽、細胞基礎培養基組成。
5.根據權利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：
所述第一次分化培養的時間為48小時；
或，所述第二次分化培養的時間為48小時。
6.根據權利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：
所述水凝膠為Matrgel；
所述多能干細胞為胚胎干細胞或誘導干細胞。
7.由權利要求1-6任一所述方法制備的心臟類器官。
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