[發明專利]一種制備人乳頭瘤病毒捕獲探針組的方法及其應用在審
| 申請號： | 202210150665.5 | 申請日： | 2022-02-18 |
| 公開（公告）號： | CN114480739A | 公開（公告）日： | 2022-05-13 |
| 發明（設計）人： | 陳世民;楊帆;何良;王志杰;黃曉園 | 申請（專利權）人： | 武漢凱德維斯醫學檢驗實驗室有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/6806;C12Q1/6874;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京君有知識產權代理事務所(普通合伙) 11630 | 代理人： | 焦麗雅 |
| 地址： | 430223 湖北省武漢市東湖新技術開發區高新二路3*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 制備 乳頭 病毒 捕獲 探針 方法 及其 應用 | ||
1.一種制備高危型人乳頭瘤病毒捕獲探針組的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)、合成15種高危型HPV的DNA序列，并構建載體，所述高危型HPV為：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66和68中的一種或多種；
(2)、合成擴增引物；
(3)、使用修飾標記的dNTP為原料、以步驟(1)的質粒分別為模板，用步驟(2)所述的引物進行滾環式擴增；
(4)、獲得的擴增產物定量，并混合；
(5)、純化步驟(4)獲得的混合產物并用超聲打斷儀打斷。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述15種高危型HPV的DNA序列為：SEQ IDNO.1-15中的一種或多種。
3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所述引物的序列為：SEQ IDNO.16。
4.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(3)中所述dNTP原料包括dATP、dGTP、dCTP、dTTP和dUTP，其中只有dUTP帶生物素標簽。
5.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(3)中所述滾環式擴增使用的酶為Phi29DNA聚合酶。
6.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(4)中擴增產物混合為等比例混合。
7.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(5)中超聲的參數設置為：超聲30秒，停20s，共60個循環。
8.一種HPV捕獲探針，其特征在于，使用如權利要求1所述的方法制備。
9.權利要求8所述捕獲探針在檢測HPV整合狀態中的應用，其特征在于，包括以下幾個步驟：
(1)、樣本DNA提取、片段化、構建DNA文庫；
(2)、用權利要求1所制備的探針組與所構建的文庫雜交，進行HPV序列靶向捕獲及定量；
(3)、高通量測序；
(4)、基因序列的生物信息分析。
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