[發明專利]用于川崎病檢測的引物組、探針及試劑盒

在審

• 申請號: 202210148577.1
• 申請日: 2022-02-18
• 公開（公告）號: CN114277127A
• 公開（公告）日: 2022-04-05
• 發明（設計）人: 李光;劉佳;丁國徽;黃敏;謝利劍
• 申請（專利權）人: 道之精準醫學科技（上海）有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 上海未可期專利代理事務所(普通合伙) 31360
• 代理人: 余佳

1.一種用于川崎病檢測的核酸序列組合，包括反轉錄引物、擴增引物和探針序列，其特征在于，所述核酸序列組合能夠有效定性/定量檢測人血液血小板中的miR-125a-5p、hsa-miR-3182、hsa-miR-3675-5p、miR-4433b-5p和miR-126，其中miR-126作為內參標志物；

其中，反轉錄引物序列如下：

miR-125a-5p-sl：CAGGGCATCAGCCTGAACCCTGAACCCTGAATAACCTGAAACTGATGCCCTGTCACAG；

hsa-miR-3182-sl：ACGGGAAACTGAGTTCAGTTCCCAGCGTCCATATCAGTTCCCAGTTTCCCGTGACTAC；

hsa-miR-3675-5p-sl：CAGGGCATCAGCCTGAACCCTGAACCCTGAATAACCTGAAACTGATGCCCTGGAAATC；

miR-4433b-5p-sl：CTTGATGGCTGCCCGTCAAGCCAGTCAAGTATCCAGTCAAGTCAGCCATCAAGACAGGA；

miR-126-sl：TTAGGGTCAGGCCTGAACCCTGAACCCTGAATGCGAACTG ACCTGACCCTAACGCATT；

擴增引物序列如下：

正向引物：

miR-125a-5p-F：CCTGAACCCTGAACCCTGA；

hsa-miR-3182-F：AGTTCAGTTCCCAGCGTCC；

hsa-miR-3675-5p-F：CCTGAACCCTGAACCCTGA；

miR-4433b-5p-F：CCCGTCAAGCCAGTCAAGT；

miR-126-F：CCTGAACCCTGAACCCTGA；

反向引物：

miR-125a-5p-R：GGTCCCTGAGACCCTTTAAC；

hsa-miR-3182-R：TGCGCGCTTCTGTAGT；

hsa-miR-3675-5p-R：CCTCTATGGGGCTTCTGTAGA；

miR-4433b-5p-R：GATGTCCCACCCCCAC；

miR-126-R：GAGCTCGTACCGTGAGTAAT；

探針序列如下：

miR-125a-5p-P：AACCTGAAACTGATGCCCTG；

hsa-miR-3182-P：ATCAGTTCCCAGTTTCCCGT；

hsa-miR-3675-5p-P：AACCTGAAACTGATGCCCTG；

miR-4433b-5p-P：CCAGTCAAGTCAGCCATCAAG；

miR-126-P：GCGAACTGACCTGACCCTAA。

2.一種用于川崎病檢測的試劑盒，其特征在于，包括反轉錄試劑、擴增試劑和如權利要求1所述的探針序列，所述探針核苷酸序列的5’端標記有熒光報告基團，3’端標記有熒光淬滅基團，所述探針核苷酸序列的熒光報告基團為FAM、HEX、VIC、ROX、Cy5中的至少一種，熒光淬滅基團為BHQ1、BHQ2、MGB中的至少一種；所述反轉錄引物序列為權利要求1所述的反轉錄引物；擴增引物為權利要求1所述的正向引物和反向引物。

3.一種檢測芯片或裝置，其包括權利要求1所述的反轉錄引物、擴增引物和探針序列。

4.權利要求1所述的反轉錄引物、擴增引物和探針序列在制備川崎病的預測、輔助診斷川崎病的試劑或工具中的應用。

5.權利要求1所述的核酸序列組合在制備定性和/或定量檢測miR-125a-5p、hsa-miR-3182、hsa-miR-3675-5p、miR-4433b-5p和miR-126試劑中的用途。