[發明專利]一種同時鑒別10種龜鱉甲類中藥的液質聯用法

在審

• 申請號: 202210144688.5
• 申請日: 2022-02-17
• 公開（公告）號: CN114487207A
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 劉宇文;楊直;盧智玲;伍勛;諶宇;鄭娟;鄒耀華;施思;潘佳星
• 申請（專利權）人: 杭州市食品藥品檢驗研究院（杭州市食品藥品審核查驗服務中心;杭州市藥品與醫療器械不良反應監測中心）
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/54;G01N30/72
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

1.一種同時鑒別10種龜鱉甲類中藥的液質聯用法，其特征在于包括如下步驟：

1)、獲得待測樣品溶液；

2)、設定色譜及質譜檢測條件；

3)、數據計算分析。

2.根據權利要求1所述的同時鑒別10種龜鱉甲類中藥的液質聯用法，其特征在于：

1)、獲得待測樣品溶液：

當待測樣品為固體時，將待測樣品先進行提取，所得提取液進行預處理，得待測樣品溶液；

當待測樣品為液體時，將待測樣品直接進行預處理，得待測樣品溶液；

2)、設定色譜及質譜檢測條件：

①、色譜條件：

色譜柱：ZORBAX Eclipse Plus C18；

流速：0.3mL·min^-1；柱溫：35℃；

流動相包括流動相A和流動相B，流動相A：0.1％甲酸，流動相B：乙腈；

梯度洗脫程序為：0～25min，A：95％→80％，B：5％→20％；25～50min，A：80％→5％，B：20％→95％；后運行時間：3min；進樣量1μL。

②、質譜條件：

儀器：6540超高效液相色譜-串聯三重四級桿質譜聯用儀；

質譜條件：ESI+離子源；掃描范圍100～3200Da；

掃描模式：多反應檢測；

離子源參數：霧化氣：50psi；干燥氣：流速為14L·min^-1；干燥氣溫度：200℃；鞘氣流速：11L·min^-1；鞘氣溫度：325℃；毛細管電壓：4kV；碎裂電壓：166V；二級質譜碰撞氣：高純氮氣；

特征離子MRM采集參數如下：

烏龜的背甲及腹甲、鱉的背甲為正品；

巴西龜、花龜、黃喉擬水龜、黃緣閉殼龜、緬甸陸龜、小鱷龜、印度楞背龜的背甲及腹甲和佛羅里達鱉的背甲為偽品；

3)、數據計算分析：

取步驟1)所得的待測樣品溶液1μL，注入超高效液相色譜-質譜聯用儀，按照步驟2)設定的條件進行測定；并根據測定結果來判斷待測樣品是正品還是偽品。

3.根據權利要求2所述的同時鑒別10種龜鱉甲類中藥的液質聯用法，其特征在于所述步驟3)為：待測樣品溶液按照步驟2)設定的條件進行測定，待測樣品溶液的MRM提取離子流圖色譜中，在如上表所示的10個品種相應的保留時間，同時獲得該品種對應的2對特征肽提取離子流色譜峰，且信噪比大于3，認為檢出該品種，反之，則判斷為未檢出該品種。

4.根據權利要求2或3所述的同時鑒別10種龜鱉甲類中藥的液質聯用法，其特征在于所述步驟1)為：

當待測樣品為固體時：將待測樣品粉碎，取1g粉碎后待測樣品，加入50mL水，先室溫浸泡1h，然后加熱回流提取1h；回流提取液冷卻至室溫后，再加入NH₄HCO₃ 0.5g攪拌至溶解，靜置，取上清液用0.22μm微孔濾膜過濾；取100μL濾液，加胰蛋白酶溶液10μL，混勻，37℃恒溫酶解12h，得待測樣品溶液；

當待測樣品為液體時，在待測樣品中加入碳酸氫銨攪拌至溶解，使碳酸氫銨的終濃度為1％，靜置，取上清液用0.22μm微孔濾膜過濾，取100μL濾液，加胰蛋白酶溶液10μL，混勻，37℃恒溫酶解12h，得待測樣品溶液；

胰蛋白酶溶液的制備方法為：在質量濃度為1％的NH₄HCO₃水溶液1mL中，加入1mg胰蛋白酶并攪拌溶解，得胰蛋白酶溶液。