[發(fā)明專(zhuān)利]一種同時(shí)測(cè)定CAH六種相關(guān)類(lèi)固醇激素的方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202210141660.6 | 申請(qǐng)日： | 2022-02-16 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN114689740A | 公開(kāi)（公告）日： | 2022-07-01 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 方炳雄;陳福;蔡勉珊;趙煒;田沛潤(rùn);劉琪;趙梅 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 普寧市人民醫(yī)院 |
| 主分類(lèi)號(hào)： | G01N30/02 | 分類(lèi)號(hào)： | G01N30/02;G01N30/72 |
| 代理公司： | 廣州容大知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44326 | 代理人： | 何雪霞 |
| 地址： | 515300 廣*** | 國(guó)省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書(shū)： | 查看更多 | 說(shuō)明書(shū)： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 同時(shí) 測(cè)定 cah 相關(guān) 類(lèi)固醇 激素 方法 | ||
1.一種同時(shí)測(cè)定CAH六種相關(guān)類(lèi)固醇激素的方法，所述六種相關(guān)類(lèi)固醇激素為17α-羥孕酮、雄烯二酮、11-脫氧皮質(zhì)醇、21-脫氧皮質(zhì)醇、皮質(zhì)醇和皮質(zhì)酮；其特征在于，包括以下步驟：
步驟S1：分別制備混合內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和標(biāo)準(zhǔn)曲線制品：所述混合內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品為17α-羥孕酮同位素內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品、雄烯二酮同位素內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品、11-脫氧皮質(zhì)醇同位素內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品、21-脫氧皮質(zhì)醇同位素內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品、皮質(zhì)醇同位素內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品和皮質(zhì)酮同位素內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品的混合物；所述質(zhì)控品為含有已知濃度的17α-羥孕酮、雄烯二酮、11-脫氧皮質(zhì)醇、21-脫氧皮質(zhì)醇、皮質(zhì)醇和皮質(zhì)酮六種類(lèi)固醇激素的人全血濾紙干血片；所述標(biāo)準(zhǔn)曲線制品為含有已知系列濃度的17α-羥孕酮、雄烯二酮、11-脫氧皮質(zhì)醇、21-脫氧皮質(zhì)醇、皮質(zhì)醇和皮質(zhì)酮六種類(lèi)固醇激素的人全血濾紙干血片；
步驟S2：制備樣本提取液：在混合內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品中加入有機(jī)溶劑，溶解后稀釋?zhuān)?/p>
步驟S3：提取和孵育樣本：用樣本提取液分別提取標(biāo)準(zhǔn)曲線制品以及待測(cè)樣本，然后進(jìn)行孵育；
步驟S4：濃縮復(fù)溶樣本：分別對(duì)孵育后的上清液進(jìn)行濃縮后，并加入50％甲醇復(fù)溶，得到復(fù)溶液；
步驟S5：測(cè)試：用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀對(duì)復(fù)溶液進(jìn)行測(cè)定，繪制校準(zhǔn)曲線，計(jì)算待測(cè)樣本中17α-羥孕酮、雄烯二酮、11-脫氧皮質(zhì)醇、21-脫氧皮質(zhì)醇、皮質(zhì)醇和皮質(zhì)酮的濃度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)測(cè)定CAH六種相關(guān)類(lèi)固醇激素的方法，其特征在于，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線制品的系列濃度為8個(gè)，依次為0.5ng/mL、2.5ng/mL、12.5ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、20ng/mL和400ng/mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)測(cè)定CAH六種相關(guān)類(lèi)固醇激素的方法，其特征在于，所述質(zhì)控品包括低濃度、高濃度兩套質(zhì)控品。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)測(cè)定CAH六種相關(guān)類(lèi)固醇激素的方法，其特征在于，步驟S2中所述有機(jī)溶劑為甲醇。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)測(cè)定CAH六種相關(guān)類(lèi)固醇激素的方法，其特征在于，步驟S3中提取樣本的具體方式為分別將標(biāo)準(zhǔn)曲線制品以及待測(cè)樣本干血斑打出血點(diǎn)，放入96孔V型板對(duì)應(yīng)孔中，每個(gè)樣本每孔需2個(gè)血點(diǎn)，然后將96孔V型板蓋上封口膜，并密封。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)測(cè)定CAH六種相關(guān)類(lèi)固醇激素的方法，其特征在于，步驟S3中所述孵育的條件為孵育溫度25～40℃、孵育轉(zhuǎn)速500rpm～700rpm、孵育時(shí)間35～70分鐘。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)測(cè)定CAH六種相關(guān)類(lèi)固醇激素的方法，其特征在于，步驟S4中濃縮的具體方式為對(duì)孵育后的樣本以4000rpm離心5min，吸取150μL上清液加入另一空白96孔V型板中，采用氮?dú)獯蹈傻姆绞竭M(jìn)行濃縮；復(fù)溶的具體方式為加入75μL的50％甲醇，密封后震蕩，然后在4℃，4000rpm離心2分鐘，取上清液為復(fù)溶液；
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)測(cè)定CAH六種相關(guān)類(lèi)固醇激素的方法，其特征在于，步驟S5中液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀的色譜條件為：流動(dòng)相包括流動(dòng)相一和流動(dòng)相二，所述流動(dòng)相一由水中添加乙酸銨和甲酸制成；所述流動(dòng)相二由甲醇中添加乙酸銨和甲酸制成；色譜柱溫為40～55℃。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的同時(shí)測(cè)定CAH六種相關(guān)類(lèi)固醇激素的方法，其特征在于，所述流動(dòng)相一為2～3mmol/L乙酸銨+0.1～12％甲酸的水溶液；所述流動(dòng)相二為2～3mmol/L乙酸銨+0.1～12％甲酸的甲醇溶液。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)測(cè)定CAH六種相關(guān)類(lèi)固醇激素的方法，其特征在于，步驟S5中液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀的質(zhì)譜條件為：檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；毛細(xì)管電壓：2.8～3KV；離子源溫度：100～200℃；脫溶劑氣溫度：550～600℃；錐孔氣流：100～200L/Hr；脫溶劑氣流：1000～1200L/Hr。
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