[發明專利]一種磷酸化Tau pT181蛋白單克隆抗體、ELISA試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202210138280.7
• 申請日: 2022-02-15
• 公開（公告）號: CN114409780A
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發明（設計）人: 王小川;王喆;曾寬;吳剛
• 申請（專利權）人: 武漢天德生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/20;C12N15/13;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/58;G01N33/68
• 代理公司: 武漢天領眾智專利代理事務所(普通合伙) 42300
• 代理人: 楊建軍

1.一種磷酸化Tau pT181蛋白單克隆抗體，其特征在于，所述磷酸化Tau pT181蛋白單克隆抗體重鏈氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，所述磷酸化Tau pT181蛋白單克隆抗體輕鏈氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。

2.如權利要求1所述的磷酸化Tau pT181蛋白單克隆抗體，其特征在于，所述磷酸化TaupT181蛋白單克隆抗體是由雜交瘤細胞株Tau-5D8分泌得到，所述雜交瘤細胞株Tau-5D8已在中國典型培養物保藏中心(CCTCC)進行保藏；地址：中國武漢武漢大學；保藏日期：2021年12月30日；保藏編號為：CCTCC NO：C2021303。

3.如權利要求1所述的磷酸化Tau pT181蛋白單克隆抗體，其特征在于，編碼所述磷酸化Tau pT181蛋白單克隆抗體重鏈核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；編碼所述磷酸化TaupT181蛋白單克隆抗體輕鏈核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

4.一種ELISA試劑盒，其特征在于，所述ELISA試劑盒包括權利要求1～3任一項所述的磷酸化Tau pT181蛋白單克隆抗體、tau(211～239)蛋白多克隆抗體、酶標板、封閉液、HRP-羊抗鼠IgG二抗、顯色液、終止液、包被液和洗滌液。

5.如權利要求4所述的ELISA試劑盒，其特征在于，所述磷酸化Tau pT181蛋白單克隆抗體作為捕獲抗體，所述tau(211～239)蛋白多克隆抗體作為檢測抗體。

6.如權利要求4所述的ELISA試劑盒，其特征在于，所述磷酸化Tau pT181蛋白單克隆抗體稀釋度為(1:600)～(1:9600)；所述tau(211～239)蛋白多克隆抗體稀釋度為(1:300)～(1:4800)。

7.如權利要求4所述的ELISA試劑盒，其特征在于，所述HRP-羊抗鼠IgG二抗稀釋度為(1:1200)～(1:9600)。

8.權利要求4～7任一項所述的ELISA試劑盒的使用方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)純化單抗包被：用包被液將磷酸化Tau pT181蛋白單克隆抗體稀釋，4℃過夜，每孔100μL，4℃冰箱過夜；

2)封閉：每孔加200μL封閉液，于37℃孵育1～2h；

3)加抗原：每孔加100μL樣品，于37℃孵育1～2h；

4)加純化多抗：用封閉液將tau(211～239)蛋白多克隆抗體稀釋，37℃孵育1～2h，每孔100μL；

5)加酶標二抗：用封閉液將HRP-羊抗鼠IgG二抗稀釋，37℃孵育1～2h，每孔100μL；

6)底物顯色：每孔加顯色液100μL，顯色10min；

7)終止反應：每孔加2mol/L濃硫酸50μL/孔，測定OD_450nm反應值；

在第1)～5)每步之間用洗滌液洗板3～5次，每次6～10min。

9.如權利要求8所述的ELISA試劑盒的使用方法，其特征在于，所述封閉液選自3％脫脂乳粉、1.5％脫脂乳粉、0.5％脫脂乳粉、2％BSA、1％BSA和0.5％BSA中的一種。

10.權利要求4～7任一項所述的ELISA試劑盒在制備檢測阿爾茨海默病試劑中的應用。