[發(fā)明專利]一種磷酸化Tau pT217蛋白單克隆抗體、ELISA試劑盒及其應用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202210137460.3 | 申請日： | 2022-02-15 |
| 公開（公告）號： | CN114539400A | 公開（公告）日： | 2022-05-27 |
| 發(fā)明（設計）人： | 王小川;王喆;曾寬;吳剛 | 申請（專利權）人： | 武漢天德生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C07K16/18 | 分類號： | C07K16/18;C12N5/20;C12N15/13;G01N33/577;G01N33/68;G01N33/58 |
| 代理公司： | 武漢天領眾智專利代理事務所(普通合伙) 42300 | 代理人： | 楊建軍 |
| 地址： | 430000 湖北省武漢市東湖新技術開發(fā)區(qū)*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 磷酸化 tau pt217 蛋白 單克隆抗體 elisa 試劑盒 及其 應用 | ||
1.一種磷酸化Tau pT217蛋白單克隆抗體，其特征在于，所述磷酸化Tau pT217蛋白單克隆抗體重鏈氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，所述磷酸化Tau pT217蛋白單克隆抗體輕鏈氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。
2.如權利要求1所述的磷酸化Tau pT217蛋白單克隆抗體，其特征在于，所述磷酸化TaupT217蛋白單克隆抗體是由雜交瘤細胞株Tau-6G12分泌得到，所述雜交瘤細胞株Tau-6G12已在中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)進行保藏；地址：中國武漢武漢大學；保藏日期：2021年12月30日；保藏編號為：CCTCC NO：C2021304。
3.如權利要求1所述的磷酸化Tau pT217蛋白單克隆抗體，其特征在于，編碼所述磷酸化Tau pT217蛋白單克隆抗體重鏈核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；編碼所述磷酸化TaupT217蛋白單克隆抗體輕鏈核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
4.一種ELISA試劑盒，其特征在于，所述ELISA試劑盒包括權利要求1～3任一項所述的磷酸化Tau pT217蛋白單克隆抗體、tau(412～434)蛋白多克隆抗體、酶標板、封閉液、HRP-羊抗鼠IgG二抗、顯色液、終止液、包被液和洗滌液。
5.如權利要求4所述的ELISA試劑盒，其特征在于，所述磷酸化Tau pT217蛋白單克隆抗體作為捕獲抗體，所述tau(412～434)蛋白多克隆抗體作為檢測抗體。
6.如權利要求4所述的ELISA試劑盒，其特征在于，所述磷酸化Tau pT217蛋白單克隆抗體稀釋度為(1:600)～(1:4800)；所述tau(412～434)蛋白多克隆抗體稀釋度為(1:600)～(1:9600)。
7.如權利要求4所述的ELISA試劑盒，其特征在于，所述HRP-羊抗鼠IgG二抗稀釋度為(1:3200)～(1:12800)。
8.權利要求4～7任一項所述的ELISA試劑盒的使用方法，其特征在于，包括如下步驟：
1)純化單抗包被：用包被液將磷酸化Tau pT217蛋白單克隆抗體稀釋，4℃過夜，每孔100μL，4℃冰箱過夜；
2)封閉：每孔加200μL封閉液，于37℃孵育0.5～1.5h；
3)加抗原：每孔加100μL樣品，于37℃孵育1～2h；
4)加純化多抗：用封閉液將tau(412～434)蛋白多克隆抗體稀釋，37℃孵育1～2h，每孔100μL；
5)加酶標二抗：用封閉液將HRP-羊抗鼠IgG二抗稀釋，37℃孵育1～2h，每孔100μL；
6)底物顯色：每孔加顯色液100μL，顯色10min；
7)終止反應：每孔加2mol/L濃硫酸50μL/孔，測定OD450nm反應值；
在第1)～5)每步之間用洗滌液洗板3～5次，每次6～10min。
9.如權利要求8所述的ELISA試劑盒的使用方法，其特征在于，所述封閉液選自5％脫脂乳粉、2.5％脫脂乳粉、0.5％脫脂乳粉、3％BSA、1％BSA和0.5％BSA中的一種。
10.權利要求4～7任一項所述的ELISA試劑盒在制備檢測阿爾茨海默病試劑中的應用。
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