[發(fā)明專利]一種快速培養(yǎng)硫自養(yǎng)反硝化細菌的發(fā)酵方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202210136381.0 | 申請日： | 2022-02-15 |
| 公開（公告）號： | CN114437981A | 公開（公告）日： | 2022-05-06 |
| 發(fā)明（設計）人： | 王凱;劉愛寶;朱輝 | 申請（專利權）人： | 科盛環(huán)保科技股份有限公司 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12N1/38;C12R1/01 |
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| 地址： | 210046 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 快速 培養(yǎng) 自養(yǎng) 硝化細菌 發(fā)酵 方法 | ||
1.一種快速培養(yǎng)硫自養(yǎng)反硝化細菌的發(fā)酵方法，其特征在于，采用一級種子培養(yǎng)基、二級發(fā)酵培養(yǎng)基對菌種的連續(xù)接種培養(yǎng)和補料培養(yǎng)基的補料發(fā)酵，實現(xiàn)硫自養(yǎng)反硝化細菌的快速制備；
其中，一級種子培養(yǎng)基包括硝酸鈉1g/L，碳酸氫鈉2g/L，硫代硫酸鈉2g/L，氯化鎂0.5g/L，磷酸氫二鉀1g/L，硫酸亞鐵0.05g/L，硫酸錳0.05-0.1g/L，氯化鈉0.05g/L；
二級發(fā)酵培養(yǎng)基包括硝酸鈉5-10g/L，碳酸氫鈉10-15g/L，硫代硫酸鈉1-2g/L，氯化鎂0.5-1g/L，磷酸氫二鉀1-2g/L，硫酸亞鐵0.05-0.1g/L，硫酸錳0.05-0.1g/L，麩皮5-10g/L，椰殼粉1-5g/L，碳酸鈣0.5-1g/L；
補料培養(yǎng)基包括硝酸鈉10g/L，碳酸氫鈉15g/L，硫代硫酸鈉20g/L；
該方法具體包括如下步驟：
步驟1、培養(yǎng)基制備：按照所述一級種子培養(yǎng)基、二級發(fā)酵培養(yǎng)基和補料培養(yǎng)基的配方進行配制，在121℃，滅菌20-30min，備用；
步驟2、一級種子液培養(yǎng)：采集缺氧池的活性污泥，麩皮粉經(jīng)過該活性污泥浸泡一周取出清洗，用一級種子培養(yǎng)基進行連續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中通過攪拌器連續(xù)攪拌24H，隨后停止攪拌，待產(chǎn)生大量氣泡，且麩皮粉漂浮為止，結束一級種子液的培養(yǎng)，得到一級種子培養(yǎng)液；
步驟3、二級發(fā)酵培養(yǎng)：向培養(yǎng)容器中加入步驟2中得到的一級種子培養(yǎng)液，按照一級種子培養(yǎng)液：二級發(fā)酵培養(yǎng)基＝50:1的比例進行接種，培養(yǎng)時間為24H，同時加以攪拌；
步驟4、補料培養(yǎng)：待二級發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)24H后，對培養(yǎng)基進行第一次流加補料，補料培養(yǎng)基的補料體積為發(fā)酵液體積的10％左右，連續(xù)發(fā)酵10h后，進行第二次流加補料，補料培養(yǎng)基的補料體積為發(fā)酵液體積的5％左右，繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)8H結束，即得到硫自養(yǎng)反硝化細菌發(fā)酵液；
步驟5、細菌活菌數(shù)的檢測：通過稀釋涂布的方法對硫自養(yǎng)反硝化細菌發(fā)酵液細菌的濃度進行檢測。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種快速培養(yǎng)硫自養(yǎng)反硝化細菌的發(fā)酵方法，其特征在于，所述二級發(fā)酵培養(yǎng)基包括硝酸鈉5g/L，碳酸氫鈉10g/L，硫代硫酸鈉1g/L，氯化鎂0.5g/L，磷酸氫二鉀1g/L，硫酸亞鐵0.05g/L，硫酸錳0.05g/L，麩皮5g/L，椰殼粉3g/L，碳酸鈣0.5g/L。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種快速培養(yǎng)硫自養(yǎng)反硝化細菌的發(fā)酵方法，其特征在于，在步驟2、3中，攪拌轉(zhuǎn)速為60rpm/min。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種快速培養(yǎng)硫自養(yǎng)反硝化細菌的發(fā)酵方法，其特征在于，在步驟2中，接種于一級種子培養(yǎng)基中進行連續(xù)培養(yǎng)的培養(yǎng)溫度控制在25-30℃，pH值控制在6.5-7.5。
5.根據(jù)權利要求1所述的一種快速培養(yǎng)硫自養(yǎng)反硝化細菌的發(fā)酵方法，其特征在于，在步驟3中，接種于二級發(fā)酵培養(yǎng)基中進行連續(xù)培養(yǎng)的培養(yǎng)溫度控制在30℃，溶解氧控制在0.5-1mg/l，pH值控制在6-8。
6.根據(jù)權利要求1所述的一種快速培養(yǎng)硫自養(yǎng)反硝化細菌的發(fā)酵方法，其特征在于，溶解氧的控制通過流加飽和亞硫酸鈉溶液來控制，溫度由反應器外部的控溫夾套來穩(wěn)定。
7.根據(jù)權利要求1所述的一種快速培養(yǎng)硫自養(yǎng)反硝化細菌的發(fā)酵方法，其特征在于，補料培養(yǎng)基在121℃條件下，滅菌20min處理。
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