[發(fā)明專利]一種結(jié)核分枝桿菌T細(xì)胞表位蛋白R(shí)v1566c-444的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210136239.6
• 申請(qǐng)日: 2022-02-15
• 公開（公告）號(hào): CN114671928A
• 公開（公告）日: 2022-06-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 萬康林;劉海燦;范雪亭;李馬超
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所
• 主分類號(hào): C07K14/35
• 分類號(hào): C07K14/35;C12N15/31;G01N33/569;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/543;A61K39/04;A61P31/06
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 孫怡

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)和免疫學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種結(jié)核分枝桿菌T細(xì)胞表位蛋白R(shí)v1566c?444的應(yīng)用。本發(fā)明提供一種結(jié)核分枝桿菌T細(xì)胞表位蛋白R(shí)v1566c?444在制備結(jié)核病檢測(cè)試劑和疫苗中的應(yīng)用；其中，所述結(jié)核分枝桿菌T細(xì)胞表位蛋白R(shí)v1566c?444的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，或?yàn)樵撔蛄薪?jīng)替換、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸形成的具有相同抗原性和免疫原性的氨基酸序列。本發(fā)明結(jié)核分枝桿菌T細(xì)胞表位蛋白R(shí)v1566c?444可減少因試劑盒固有蛋白抗原刺激T細(xì)胞造成的假陰性，從而提高檢測(cè)靈敏度。細(xì)胞免疫反應(yīng)佳，可廣泛用于結(jié)核病的輔助診斷、流行病學(xué)監(jiān)測(cè)與感染篩查等相關(guān)領(lǐng)域并為抗結(jié)核新疫苗的研制提供了新的思路。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)和免疫學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種結(jié)核分枝桿菌T細(xì)胞表位蛋白R(shí)v1566c-444的應(yīng)用。

背景技術(shù)

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的一種人畜共患傳染病。其發(fā)病率、患病率和致死率高、易產(chǎn)生耐藥和多重耐藥性，且耐藥性不斷增加。快速即時(shí)診斷檢測(cè)、新疫苗或有效的預(yù)防性治療是終止結(jié)核病流行需要優(yōu)先解決的問題。

結(jié)核病的早期診斷對(duì)結(jié)核病的控制至關(guān)重要，快速、敏感和特異的診斷工具的缺乏對(duì)結(jié)核病的防治造成了巨大挑戰(zhàn)。抗結(jié)核病的保護(hù)性免疫機(jī)制目前仍不完全清楚，細(xì)胞免疫尤其是循環(huán)及感染部位的T淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答被認(rèn)為起著重要作用。因此，能否有效地激發(fā)機(jī)體的T細(xì)胞免疫應(yīng)答，尤其是CD4⁺T細(xì)胞免疫反應(yīng)是機(jī)體成功對(duì)抗結(jié)核感染的關(guān)鍵。被病原菌致敏的T淋巴細(xì)胞，再次受到同種抗原刺激后，會(huì)釋放γ干擾素，高水平的γ干擾素反應(yīng)可以用來評(píng)估細(xì)胞介導(dǎo)的宿主免疫反應(yīng)，因此，提示該病原菌的感染。近年來，免疫學(xué)方法在結(jié)核病或潛伏性結(jié)核病感染(LTBI)的診斷中發(fā)揮著越來越重要的作用，伴隨著基因組學(xué)的發(fā)展，市面上出現(xiàn)了以T細(xì)胞為基礎(chǔ)的體外γ干擾素釋放試驗(yàn)(IGRA)(LoBue PA，2012，JAMA 308:241–2)，可用于結(jié)核病輔助診斷和結(jié)核感染篩查。以結(jié)核分枝桿菌基因組RD1區(qū)編碼的結(jié)核特異性抗原6kDa早期分泌抗原靶標(biāo)[ESAT-6]和培養(yǎng)濾液蛋白10[CFP-10]為刺激物的商品化IGRA試劑，如利用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)技術(shù)檢測(cè)的QuantiFERON-TB Gold test和利用固相酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)(ELISPOT)技術(shù)檢測(cè)的T-SPOT.TB test，目前已經(jīng)被用于檢測(cè)外周血中結(jié)核特異性釋放γ干擾素的T淋巴細(xì)胞，能夠呈現(xiàn)較高的靈敏性和特異性。

卡介苗(BCG)是目前唯一獲批用于人體的抗結(jié)核疫苗,其被證明能誘導(dǎo)人體產(chǎn)生保護(hù)性免疫，但確只對(duì)兒童結(jié)核具有有限的免疫保護(hù)作用。新的抗結(jié)核疫苗的開發(fā)策略主要是作為卡介苗的替代品以及卡介苗初免后的異種加免疫苗來預(yù)防結(jié)核感染，或者對(duì)潛伏感染者進(jìn)行預(yù)防干預(yù)，或作為治療性疫苗。混合佐劑的重組蛋白亞單位疫苗因其良好的安全性以及成分明確等優(yōu)點(diǎn)而備受矚目，在小鼠模型中，結(jié)核抗原Ag85B可以引發(fā)對(duì)抗結(jié)核分枝桿菌攻擊的強(qiáng)Th1免疫反應(yīng)(Ahmad F，2017，F(xiàn)ront Immunol 8:1608)，因此免疫顯性抗原Ag85B是可用于新型抗結(jié)核疫苗研發(fā)的重要抗原之一。

結(jié)核抗原的免疫原性對(duì)于以免疫顯性抗原引起的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)發(fā)揮作用的結(jié)核診斷試劑與抗結(jié)核新疫苗的研發(fā)起決定性作用。因?yàn)榻Y(jié)核分枝桿菌的獨(dú)特胞內(nèi)生存模式，在結(jié)核病患者體內(nèi)主要是由T細(xì)胞介導(dǎo)針對(duì)結(jié)核分枝桿菌感染的保護(hù)性免疫應(yīng)答，因此，能引起強(qiáng)烈T細(xì)胞免疫反應(yīng)的結(jié)核抗原可以作為結(jié)核診斷試劑與抗結(jié)核新疫苗的候選組分。抗原表位是抗原的一部分，是抗原性的核心基礎(chǔ)；抗原通過抗原表位與相應(yīng)的淋巴細(xì)胞表面受體結(jié)合從而致敏淋巴細(xì)胞、引起免疫應(yīng)答，即免疫反應(yīng)的特異性是針對(duì)抗原表位，而不是針對(duì)整個(gè)抗原，抗原表位在抗原誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的過程中起著決定性作用。抗原的T細(xì)胞表位是決定抗原能夠引起人體T細(xì)胞反應(yīng)的特殊化學(xué)基團(tuán)，富含T細(xì)胞表位的蛋白抗原在結(jié)核診斷試劑與抗結(jié)核新疫苗研發(fā)方面具有巨大潛力。