[發(fā)明專(zhuān)利]人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化誘導(dǎo)劑及其用途

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210135720.3
• 申請(qǐng)日: 2022-02-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114540284A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-05-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 不公告發(fā)明人
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 淮安泰凱睿醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/077
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/077;C12N5/0775
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明公開(kāi)了人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化誘導(dǎo)劑及其用途。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，黃腐酚可以誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化，可以用作人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化誘導(dǎo)劑并用于制備誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化的培養(yǎng)基。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于干細(xì)胞領(lǐng)域，涉及干細(xì)胞的定向誘導(dǎo)分化，具體涉及人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化誘導(dǎo)劑及其用途。

背景技術(shù)

間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源十分廣泛，最初在骨髓中分離得到，但骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞受供體年齡和健康狀況的影響，并且其收集過(guò)程會(huì)對(duì)供體造成創(chuàng)傷。近年來(lái)，臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的理想替代物，臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞能表達(dá)多種胚胎干細(xì)胞特有的分子標(biāo)志，分化潛力大、增殖能力強(qiáng)、免疫原性低、取材方便、無(wú)倫理道德問(wèn)題的限制，是最具臨床應(yīng)用前景的多能干細(xì)胞之一。

急性創(chuàng)傷及退行性關(guān)節(jié)疾病均可能導(dǎo)致軟骨損傷，由于關(guān)節(jié)軟骨無(wú)血管、無(wú)神經(jīng)、無(wú)淋巴管以及缺乏干細(xì)胞的特征，使其自我修復(fù)潛力非常有限，若不及時(shí)治療，最終將發(fā)展為骨關(guān)節(jié)炎。傳統(tǒng)的關(guān)節(jié)鏡清理、骨髓刺激技術(shù)、自體或同種異體骨軟骨移植、自體軟骨細(xì)胞移植和金屬等人工材料修復(fù)或替代局部軟骨損傷，存在纖維軟骨再生、供體部位并發(fā)癥、移植物失敗、種子細(xì)胞去分化、替代物松動(dòng)翻修等局限性和不足。近些年來(lái)，基于臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞等間充質(zhì)干細(xì)胞的再生醫(yī)學(xué)為軟骨病損提供了一種很有希望的治療策略。

尋找經(jīng)濟(jì)有效的誘導(dǎo)劑，是實(shí)現(xiàn)以臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞為軟骨組織工程種子細(xì)胞的關(guān)鍵。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化誘導(dǎo)劑及其用途。

本發(fā)明目的通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

黃腐酚用作人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化誘導(dǎo)劑的用途。

黃腐酚用于誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化的用途。

黃腐酚用于制備誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化的培養(yǎng)基的用途。

技術(shù)效果：

本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，黃腐酚可以誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化，可以用作人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化誘導(dǎo)劑并用于制備誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化的培養(yǎng)基。

附圖說(shuō)明

圖1為hUCMSCs倒置顯微鏡下觀察結(jié)果。

圖2為阿利辛藍(lán)染色結(jié)果。

圖3為westernblot凝膠成像圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例具體介紹本發(fā)明實(shí)質(zhì)性?xún)?nèi)容，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道，不應(yīng)將本發(fā)明的保護(hù)范圍局限于該具體實(shí)施例。

一、實(shí)驗(yàn)材料

黃腐酚購(gòu)自上海源葉生物，HPLC≥99％。

人臍帶組織取自健康足月順產(chǎn)胎兒，置于含有1％雙抗的無(wú)菌PBS溶液中，8h內(nèi)使用。

α-MEM培養(yǎng)基、胎牛血清FBS和胰酶購(gòu)自美國(guó)Gibco公司。

FITC或PE標(biāo)記的小鼠抗人CD90、CD105、CD73、CD14、CD19、CD34、CD45和HLA-DR抗體及各相關(guān)同型對(duì)照購(gòu)自美國(guó)eBioscince公司。

SOX9、COLⅡ和β-actin一抗以及HRP標(biāo)記二抗購(gòu)自Abcam。

二、實(shí)驗(yàn)方法

1、臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hUCMSCs)的分離、培養(yǎng)和鑒定