[發明專利]Rv2779c基因及其表達產物作為抗結核分枝桿菌靶點的應用

在審

• 申請號: 202210132724.6
• 申請日: 2022-02-14
• 公開（公告）號: CN114438106A
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 陳素婷;黃海榮;滕田璐;鄭繼芳;尚園園;鮑生娟
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學附屬北京胸科醫院;北京市結核病胸部腫瘤研究所
• 主分類號: C12N15/31
• 分類號: C12N15/31;C12N15/90;C12N15/74;C12N1/21;C12Q1/6883;A61K31/496;A61K31/7036;A61K39/04;A61K45/00;A61P31/06;C12R1/32
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 王闖

本發明公開了Rv2779c基因及其表達產物作為抗結核分枝桿菌靶點的應用，涉及生物醫藥技術領域。本發明首次發現，Rv2779c基因的敲除突變極大降低了結核分枝桿菌在藥物(如利福平或鏈霉素)壓力下的持留生長，同時降低了結核分枝桿菌在感染小鼠體內的存活率。因此，可將Rv2779c基因作為作用靶點用于篩選或制備抗結核分枝桿菌(尤其是抗耐藥性結核分枝桿菌)的藥物，Rv2779c基因可作為潛在的抗結核藥物新靶點。

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，尤其是涉及Rv2779c基因及其表達產物作為抗結核分枝桿菌靶點的應用。

背景技術

結核病是一種非常古老的傳染病，也是目前依然危害人類健康的重大傳染性疾病之一。盡管在上個世紀四、五十年代，鏈霉素等抗生素的發現為結核病的治療提供了有效手段，但近年來隨著耐藥結核病的發生，耐藥結核病形式日趨嚴重，抗結核新藥靶點的開發是防治耐藥結核病的可靠保證。

目前對于結核病抗藥靶點開發主要集中在核糖體代謝或能量代謝的相關基因，但對于單基因的藥物靶點可能更容易發生耐藥。轉錄調控因子可以操縱細菌基因組中多個基因的轉錄表達，認為其更具有抗結核新藥靶點開發的潛在價值。

Rv2779c基因是可能的結核分枝桿菌的亮氨酸應答調節蛋白/天冬酰胺合成酶C家族轉錄調控因子(亦被稱為饑餓筵席調節蛋白)的編碼基因，該家族蛋白或廣泛(Lrp)或特異性(AsnC)地參與了多種細胞代謝過程的調控，諸如：氨基酸代謝、菌毛的合成、DNA修復和重組。既往研究發現Rv2779c在營養不良的結核分枝桿菌模型中，該基因的轉錄水平可提高三至四倍，被認為在病原體的潛伏/持留感染階段發揮重要作用。然而，目前，對于該基因敲除或者失活后產生的影響并沒有具體的相關報道。

鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供Rv2779c基因及其表達產物作為抗結核分枝桿菌靶點的應用。本發明首次發現，Rv2779c基因的敲除突變極大降低了結核分枝桿菌在藥物(如利福平)壓力下的持留生長，同時降低了結核分枝桿菌在感染小鼠體內的存活率。研究表明Rv2779c基因可作為潛在的抗結核藥物新靶點。

本發明提供的具體技術方案如下：

在一個方面，本發明提供了Rv2779c基因及其表達產物作為抗結核分枝桿菌靶點的應用。

在一個具體的實施方案中，所述應用包括以Rv2779c基因及其表達產物為作用靶點制備或篩選抗結核分枝桿菌(優選抗耐藥性結核分枝桿菌，例如抗利福平或鏈霉素耐藥性結核分枝桿菌)的藥物。在本發明中，表達產物通常指基因表達過程中形成的RNA或蛋白質。

在本發明中，所述藥物包括抑制Rv2779c基因表達的試劑和/或抑制Rv2779c基因表達產物的試劑。所述藥物還包括藥學上可接受的載體，該載體可為賦形劑、稀釋劑、增稠劑、填充劑、結合劑、崩解劑、潤滑劑、表面活性劑、懸浮劑、膠凝劑、輔助劑、防腐劑、抗氧化劑、穩定劑、著色劑或香中的一種或多種。所述藥物可應用于哺乳動物，所述哺乳動物包括大鼠、小鼠或人。

在一個實施方案中，所述應用包括通過基因工程方法敲除或者敲減Rv2779c基因；優選地，所述基因工程方法包括同源重組方法。所述同源重組方法為同源雙交換、T-DNA插入、CRISPR/Cas9技術、TALEN技術、Red/ET重組技術中任一種。

在一個具體的實施方案中，所述同源重組方法包括：

(a)針對結核分枝桿菌的Rv2779c基因上下游及內側的左右翼同源重組臂擴增引物對以H37Rv的基因組DNA為模板，擴增同源重組臂；

(b)將重組臂構建到AE159穿梭質粒中，利用溫度敏感性噬菌體介導的將同源重組質粒導入H37Rv中；