[發明專利]一種清金益氣組合物的檢測方法及其指紋圖譜構建方法

有效

• 申請號: 202210132642.1
• 申請日: 2022-02-14
• 公開（公告）號: CN114609269B
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 劉志東;張伯禮;張俊華;祁東利;王躍飛;鄧秀平;常艷旭;惠玉玉
• 申請（專利權）人: 天津中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 陸藝

1.一種清金益氣組合物的檢測方法，其特征是包括以下步驟：

S1異阿魏酸、橙皮苷、甘草酸銨：

a混合對照品溶液制備：精密稱取對照品異阿魏酸、橙皮苷、甘草酸銨，加甲醇配制成每1mL含有異阿魏酸10.28μg、橙皮苷75.04μg、甘草酸銨41.92μg的溶液；

b清金益氣組合物供試品溶液制備：取清金益氣組合物0.50g，于50mL的錐形瓶中，精密加入25mL體積濃度為70％甲醇水溶液，超聲20min溶解，放冷后補足失重，搖勻，取上清液過0.22μm濾膜，即得；

c清金益氣的陰性組合物溶液制備：取清金益氣缺升麻的陰性組合物、清金益氣缺陳皮的陰性組合物、清金益氣缺甘草的陰性組合物，各0.50g，于50mL的錐形瓶中，分別精密加入25mL體積濃度為70％甲醇水溶液，超聲20min溶解，放冷后補足失重，搖勻，取上清液過0.22μm濾膜，即得；

d測定清金益氣組合物中異阿魏酸、橙皮苷、甘草酸銨的含量的色譜條件：色譜柱為Agilent 5 TC-C18，250×4.6mm，5μm；流動相A相：體積濃度0.1％磷酸水溶液，流動相B相：乙腈；梯度洗脫程序為0-10min，5％B；10-25min，5％-10％B；25-35min，10％-12％B；35-50min，12％-14％B；50-70min，14％-15％B；70-75min，15％-16％B；75-80min，16％-21％B；80-100min，21％-23％B；100-125min，23％-24％B；125-130min，24％-35％B；130-140min，35％-39％B；140-148min，39％B；148-155min，39％-50％B；155-165min，50％-90％B；檢測波長為237nm-甘草酸銨、280nm-異阿魏酸、橙皮苷；流速：1.0mL/min；進樣量：10μL；柱溫：30℃；

e分別精密吸取混合對照品溶液、清金益氣組合物供試品溶液、步驟c獲得的清金益氣的陰性組合物溶液，注入液相色譜儀，按步驟d所述色譜條件，測定，即得；

S2戟葉馬鞭草苷、馬鞭草苷、黃芩苷、漢黃芩苷：

a′混合對照品溶液的制備：精密稱取對照品戟葉馬鞭草苷、馬鞭草苷、黃芩苷、漢黃芩苷，加甲醇配制成每1mL含有戟葉馬鞭草苷10.00μg、馬鞭草苷10.14μg、黃芩苷65.7μg、漢黃芩苷20.04μg的溶液；

b′清金益氣組合物供試品溶液制備：取清金益氣組合物0.50g，于50mL的錐形瓶中，精密加入25mL體積濃度為70％甲醇水溶液，超聲20min溶解，放冷后補足失重，搖勻，取上清液過0.22μm濾膜，精密吸取濾液5mL置25mL容量瓶中，加體積濃度為70％甲醇水溶液，定容，即得；

c′清金益氣的陰性組合物溶液制備：取清金益氣缺馬鞭草的陰性組合物、清金益氣缺黃芩的陰性組合物，各0.50g，于50mL的錐形瓶中，分別精密加入25mL體積濃度為70％甲醇水溶液，超聲20min溶解，放冷后補足失重，搖勻，取上清液過0.22μm濾膜，精密吸取濾液5mL置25mL容量瓶中，加體積濃度為70％甲醇水溶液，定容，即得；

d′色譜條件：色譜柱為Agilent 5 TC-C-18，250×4.6mm，5μm；流動相A相：體積濃度0.1％磷酸水溶液，流動相B相：乙腈；梯度洗脫程序為0-10min，5％-12％B；10-15min，12％B；15-55min，12％-40％B；55-60min，40％-90％B；檢測波長為237nm-戟葉馬鞭草苷、馬鞭草苷、280nm-黃芩苷、漢黃芩苷；流速：1.0mL/min；進樣量：10μL；柱溫:30℃；

e′分別精密吸取混合對照品溶液、清金益氣組合物供試品溶液、步驟c′獲得的清金益氣的陰性組合物溶液，注入液相色譜儀，按步驟d′所述色譜條件，測定，即得。

2.一種清金益氣組合物的指紋圖譜構建方法，其特征是包括以下步驟：

a″混合對照品溶液的制備：分別精密稱取對照品戟葉馬鞭草苷、馬鞭草苷、黃芩苷、漢黃芩苷、異阿魏酸、橙皮苷和甘草酸銨，加甲醇，配制成每1mL含有戟葉馬鞭草苷13μg、馬鞭草苷13.5μg、黃芩苷150.5μg、漢黃芩苷30μg、異阿魏酸7.4μg、橙皮苷73μg和甘草酸銨15.6μg的溶液；

b″供試品溶液的制備：取至少7批次的清金益氣組合物，各0.50g，分別置于具塞錐形瓶中，加入25mL體積濃度為70％的甲醇水溶液，超聲，取上清液，得到至少7個供試品溶液；

c″測定：分別精密量取混合對照品溶液和至少7批次供試品溶液各10μL，分別使用高效液相色譜進行檢測，色譜柱為Agilent 5 TC-C18，250×4.6mm，5μm；采用梯度洗脫，流動相為A和B組成，A為體積濃度0.1％磷酸水溶液，B為乙腈，所述梯度洗脫程序如下：0-10min，5％B；10-25min，5％-10％B；25-35min，10％-12％B；35-50min，12％-14％B；50-70min，14％-15％B；70-75min，15％-16％B；75-80min，16％-21％B；80-100min，21％-23％B；100-125min，23％-24％B；125-130min，24％-35％B；130-140min，35％-39％B；140-148min，39％B；148-155min，39％-50％B；155-165min，50％-90％B；檢測波長為237nm；流速：1.0mL/min；進樣量：10μL；柱溫：30℃；得到混合對照品圖譜和相應的至少7批次清金益氣組合物指紋圖譜；

d″將至少7批次清金益氣組合物指紋圖譜采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統”進行數據分析，以第1批次的清金益氣組合物指紋圖譜為參照圖譜，采用平均數法，進行多點校正和Mark峰匹配，生成清金益氣組合物對照指紋圖譜，共標定13個共有峰，與混合對照品圖譜比對，指認其中7個色譜峰，分別是1號峰戟葉馬鞭草苷、2號峰馬鞭草苷、3號峰異阿魏酸、7號峰橙皮苷、8號峰黃芩苷、12號峰漢黃芩苷、13號峰甘草酸銨；以對照指紋圖譜為基準，計算至少7批次的清金益氣組合物指紋圖譜與對照指紋圖譜的相似度。