[發明專利]一種檢測生物組織鐵含量的MALDI質譜成像方法

有效

• 申請號: 202210128781.7
• 申請日: 2022-02-11
• 公開（公告）號: CN114460163B
• 公開（公告）日: 2023-03-03
• 發明（設計）人: 韓康;劉澤軍
• 申請（專利權）人: 河北師范大學
• 主分類號: G01N27/64
• 分類號: G01N27/64
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 崔自京

本發明公開了一種檢測生物組織鐵含量的MALDI質譜成像方法，具體包括以下步驟：(1)將去鐵胺溶解在生理鹽水中，得到去鐵胺溶液；(2)小鼠尾靜脈注射去鐵胺溶液，等待后選取小鼠的生物組織和血清；(3)將生物組織冰凍后切片，將血清滴加在載玻片上，并在載玻片上噴涂基質；(4)MALDI質譜成像儀掃描樣品區域，測定去鐵胺和鐵胺的表達水平。本發明質譜成像方法針對性更強，更具有檢測意義，并且可以對生物組織切片進行原位成像，解決了現有技術只能檢測總鐵含量的技術難題。

技術領域

本發明涉及分析檢測技術領域，更具體的說是涉及一種檢測生物組織鐵含量的MALDI質譜成像方法。

背景技術

目前，生物組織樣本或血液里鐵含量的檢測方法有電感耦合等離子體質譜儀(ICP-MS)或者原子吸收(AAS)。但是，該技術方法需要將生物組織樣本進行消解，而且只能測定生物組織樣本中的總鐵含量，卻無法對生物組織樣本進行原位成像。

因此，如何快速有效地檢測生物組織鐵含量是本領域技術人員亟需解決的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種檢測生物組織鐵含量的MALDI質譜成像方法，以解決現有技術中的不足。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種檢測生物組織鐵含量的MALDI質譜成像方法，具體包括以下步驟：

(1)將去鐵胺溶解在生理鹽水中，得到去鐵胺(DFO)溶液；

(2)小鼠尾靜脈注射去鐵胺溶液，等待后選取小鼠的生物組織和血清；

(3)將生物組織冰凍后切片，將血清滴加在載玻片上，并在載玻片上噴涂基質；

(4)MALDI質譜成像儀掃描樣品區域，測定去鐵胺和鐵胺(FO)的表達水平。

進一步，上述步驟(1)中，去鐵胺溶液的濃度為50mg/mL。

采用上述進一步技術方案的有益效果在于，DFO能與鐵蛋白、含鐵血黃素以及自由鐵中的鐵離子相結合并反應生成FO，但對轉鐵蛋白中的鐵離子清除作用不強，更不能清除血紅蛋白、肌球蛋白和細胞色素中的鐵離子。

進一步，上述步驟(2)中，注射去鐵胺溶液的體積為125μL；等待的時間為5min；生物組織包括肝臟、脾臟和腎臟。

采用上述進一步技術方案的有益效果在于，等待5min后，生物組織中DFO含量水平最高。

進一步，上述步驟(3)中，切片的厚度為15μm；血清的滴加體積為0.15μL；基質為2,5-二羥基苯甲酸(DHB)基質。

采用上述進一步技術方案的有益效果在于，質譜成像技術要求冰凍切片的厚度一般不大于20μm，否則不利于成像的分辨率，如果組織切片太薄(低于10μm)則對切片的質量不能保證，尤其是肝臟組織。折中考慮我們選擇組織切片的厚度為15μm，可以滿足實驗要求。血清的體積沒有特殊要求，是根據檢測時間來優化的，體積越大在載玻片上形成的樣品面積越大，增加了檢測時間，因此在滿足實驗要求的條件下，我們選擇了0.15μL的血清體積，既可以用移液槍準確量取，又使檢測時間合理可行。DHB是MALDI質譜成像儀常用的一種基質，主要作用有以下幾個方面：1.把樣品分子隔離開；2.吸收激光能量；3.提供卷流，將樣品分子送入氣相；4.提供反應離子，將樣品離子化。

經由上述的技術方案可知，與現有技術相比，本發明的有益效果如下：

1、本發明是以質譜技術為基礎的成像方法，該方法通過MALDI離子源直接掃描生物組織樣品成像，可實現不同分子的空間分布特征。