[發(fā)明專利]一種快速鑒別馬屬動物速度基因SNP位點基因型的核酸檢測PCR引物、探針及方法

在審

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• 申請日: 2022-02-11
• 公開（公告）號: CN114395633A
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發(fā)明（設計）人: 嘎利兵嘎;烏英嘎
• 申請（專利權）人: 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學職業(yè)技術學院
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京挺立專利事務所(普通合伙) 11265
• 代理人: 張亞偉

1.一種快速鑒別馬屬動物速度基因SNP位點基因型的核酸檢測PCR引物，其特征在于核苷酸序列如下所示：

引物Hurd-f：5ˊ-GACACAACAGTTTCAAAATATTGTTCTCCTT-3ˊ

引物Hurd-r：5ˊ-CCAGGACTATTTGATAGCAGAGTCA-3ˊ。

2.一種快速鑒別馬屬動物速度基因SNP位點基因型的核酸檢測探針，其特征在于核苷酸序列如下所示：

探針P：5ˊ-CAGGTTATAATGCACCAAATAATTTTC-3ˊ。

3.根據(jù)權利要求2所述的探針，所述探針序列5ˊ端標記的熒光基團為FAM、HEX、VIC、CY5、TET中的任意一種，探針序列3ˊ端標記的淬滅基團為TAMRA、MGB、BHQ中的任意一種。

4.一種快速鑒別馬屬動物速度基因SNP位點基因型的核酸檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

S01 從血液樣品中提取基因組DNA；

S02 以提取的DNA為模板，用權利要求1中所述的引物Hurd-f和Hurd-r，及權利要求2中所述的探針p進行熒光PCR擴增反應獲得擴增產(chǎn)物；

S03 對擴增產(chǎn)物進行熔解曲線分析，確定樣品基因型，得到馬屬動物的表現(xiàn)型。

5.根據(jù)權利要求4所述的檢測方法，其特征在于：

在引物Hurd-f、Hurd-r和探針P的熒光檢測結(jié)果中，若樣品出現(xiàn)2個熔解峰則判定為雜合基因型；

在引物Hurd-f、Hurd-r和探針P的熒光檢測結(jié)果中，若樣品出現(xiàn)1個熔解峰，熔解溫度為56.3±1.0℃則判定為突變純合型（C/C）；

在引物Hurd-f、Hurd-r和探針P的熒光檢測結(jié)果中，若樣品出現(xiàn)1個熔解峰，熔解溫度為61.7±1.0℃則判定為野生純合型（T/T）。

6.根據(jù)權利要求4所述的檢測方法，其特征在于：步驟S02中的熒光PCR擴增反應體系為：

ddH₂ O 2.5μl

Premix Ex-Taq 5.0μl

1μM引物Hurd-f 0.5μl

10μM 引物Hurd-r 0.5μl

10μM 探針P 0.5μl

DNA模板 1.0μl

總體積 10μl。

7.根據(jù)權利要求4所述的檢測方法，其特征在于：步驟S02中的熒光PCR擴增反應程序為：95℃預變性5min；95℃變性15s，55℃退火15s，72℃延伸15s；循環(huán)50次。

8.根據(jù)權利要求4所述的檢測方法，其特征在于：步驟S03中的熔解曲線分析程序為：95℃變性3min；37℃退火3min；43℃到75℃以0 .1℃/s的速率，5次/℃連續(xù)采集探針P的熒光信號，進行熔解曲線分析。