[發明專利]基于CRISPR檢測腦卒中相關TBXAS1基因的試劑盒

在審

• 申請號: 202210127491.0
• 申請日: 2022-02-10
• 公開（公告）號: CN114480623A
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 肖以磊;于福華;張樹葆;周杰;許鵬;徐振濤;侯磊;程誠;姚杰
• 申請（專利權）人: 江蘇博嘉生物醫學科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/113;C12N15/11
• 代理公司: 武漢智嘉聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 42231
• 代理人: 姜婷

本發明屬于基因檢測技術領域，公開了基于CRISPR檢測腦卒中相關TBXAS1基因的試劑盒，所述試劑盒包括針對TBXAS1基因rs2267682和rs10487667位點設計的突變型crDNA或突變型crRNA，其序列如SEQ ID NO.1～4所示，結合CRISPR?cas12a系統，能確定待測樣本中是否存在TBXAS1基因rs2267682和/或rs10487667位點的基因突變，具備特異性強、準確性高、檢測速度快等優點，應用前景廣闊。

技術領域

本發明屬于基因檢測技術領域，具體涉及一種基于CRISPR檢測腦卒中相關TBXAS1基因的試劑盒。

背景技術

腦卒中又稱中風，在世界范圍內，中風是致殘和死亡的主要原因。在中國，缺血性中風約占所有中風病例的70％，其發病率表現出顯著的地理差異，表現為中國北方的發病率最高，而中國南方的發病率較低。盡管年齡、高血壓、糖尿病和環境因素是缺血性中風的眾所周知的危險因素，但它是一種多因素多基因疾病。識別與缺血性卒中風險相關的基因變異可以闡明卒中的發病機制，并為預防和治療這一復雜疾病提供新的方法。盡管一些全基因組關聯研究評估了可能導致缺血性中風的各種多態性，而在中國個體中，與缺血性卒中易感性相關的遺傳變異尚未明確確定。

血栓素A合酶1(TBXAS1)是花生四烯酸代謝的下游酶，是合成血栓素A2(TXA2)所必需的酶，現有研究認為TXA2與動脈粥樣硬化病變的發展和血栓形成有關。rs2267682和rs10487667是TBXAS1基因的兩種內含子單核苷酸多態性(SNP)變異，可能影響TBXAS1 mRNA的結構和穩定性，從而影響TXA2的代謝物生成；同時研究表明rs2267682TBXAS1多態性與缺血性卒中相關。

現階段臨床一般通過定量即時聚合酶鏈鎖反應(Quantitative real timepolymerase chain reaction，Q-PCR)、非放射性原位雜交技術(fluorescence insituhybridization，Fish)、多重引物PCR(multiplex PCR)等方式對患者進行基因突變檢測，熒光檢測具有靈敏度高，選擇性好等優點，在生物檢測與生化分析中起著不可替代的作用。然而這些檢測技術存在檢測時間長、過程復雜或檢測成本過高等問題，導致無法應用到大規模的臨床樣本研究中。因此亟需提供一種溫度控制簡單，且靈敏度、特異性高的特異性片段檢測方法。

RNA引導的成簇規則間隔短回文重復序列-CRISPR(CRISPR-Cas)相關方法由于其高可靠性和特異性而在快速核酸檢測方面顯示出相當大的前景。目前已經開發了幾種類型的Cas核酸酶用于CRISPR-Cas系統，例如Cas9、Cas12等，已顯示出快速、靈敏和特異性檢測核酸的強大實用潛力。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于解決現有技術中檢測時間長、成本過高和準確性不高以致無法大規模應用的問題，提供了一種基于CRISPR技術檢測與腦卒中相關的TBXAS1基因是否存在rs2267682和/或rs10487667目標突變位點和檢測該靶核酸在目標區域是否存在突變的方法和試劑盒。

為了實現上述目的，本發明具體采用以下技術方案：

一種檢測試劑盒，所述檢測試劑盒包括突變型crDNA或突變型crRNA；

所述突變型crDNA為如下任一：

A1).rs2267682突變型crDNA，其序列如SEQ ID NO.1所示；

A2).rs10487667突變型crDNA，其序列如SEQ ID NO.2所示；

A3).A1)和A2)；

所述突變型crRNA為如下任一：

B1).rs2267682突變型crRNA，其序列如SEQ ID NO.3所示；