[發(fā)明專利]從母乳中分離阿克曼氏菌的方法以及產(chǎn)品

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210120736.7
• 申請(qǐng)日: 2022-02-09
• 公開（公告）號(hào): CN114410473A
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉洋洋;鄭麗君;王曄;智發(fā)朝;林渝清
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州知易生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/02
• 分類號(hào): C12N1/02;C12N1/20;C12Q1/689;C12Q1/686;C12R1/01
• 代理公司: 華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 王秉麗

本發(fā)明涉及一種從母乳中分離阿克曼氏菌的方法，所述方法包括如下步驟：對(duì)母乳樣本進(jìn)行16S菌群分析，篩選出含有阿克曼氏菌的母乳樣本；用稀釋劑對(duì)所述含有阿克曼氏菌的母乳樣本進(jìn)行稀釋，制備樣本稀釋液；將所述樣本稀釋液接種至富集培養(yǎng)基進(jìn)行富集培養(yǎng)，制備富集培養(yǎng)液；將所述富集培養(yǎng)液接種于分離培養(yǎng)基進(jìn)行分離培養(yǎng)，收集培養(yǎng)物。采用本發(fā)明方法，能夠從母乳樣本中分離得到阿克曼氏菌。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種從母乳中分離阿克曼氏菌的方法以及產(chǎn)品。

背景技術(shù)

Akkermansia muciniphila(Akk)是定植在胃腸道黏液層的可特異性降解黏蛋白的革蘭氏陰性嚴(yán)格厭氧菌，最先是在2004年由荷蘭瓦赫寧根大學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的研究者們從人類糞便中分離得到。并經(jīng)過鑒定，得到一種新的黏液降解菌(標(biāo)準(zhǔn)株ATCC BAA-835)。Akkermansiaceae從屬于Akkermansia屬、疣微菌門，為疣微菌門第Ⅱ科(FamilyII.Akkermansiaceae fam.nov.)，Akkermansia屬是科內(nèi)唯一菌屬，該屬和其16SrRNA極度相關(guān)的序列廣泛存在于脊椎動(dòng)物(如人、兔、小鼠和蟒蛇等)的腸道內(nèi)。

近年來的許多研究表明，Akk和人類的許多代謝疾病有一定的關(guān)聯(lián)。研究發(fā)現(xiàn)，Akk具有良好的調(diào)節(jié)代謝的能力，口服Akk可改善動(dòng)物脂代謝和腸道通透性，起到預(yù)防肥胖和改善脂多糖內(nèi)毒素血癥的作用。初步的臨床實(shí)驗(yàn)也表明，Akk安全性良好，適量補(bǔ)充可顯著降低超重和肥胖患者的胰島素分泌和總膽固醇水平，減輕胰島素抵抗。此外，在炎癥性腸病、糖尿病、自閉癥、癲癇、高血壓等疾病中也相繼報(bào)道了Akk改善疾病癥狀的作用。Akk與機(jī)體腸道生態(tài)、代謝、神經(jīng)等生理狀態(tài)密切相關(guān)，具有良好的腸道益生作用。在已鑒定的下一代有益微生物中，人類腸道菌群中的Akk是一種非常有前景的候選細(xì)菌。

Akk作為典型的腸道厭氧菌，其分離和純化難度極大，目前成功分離到的菌株十分有限：例如Muriel Derrien等發(fā)表的“Akkermansia muciniphila gen.nov.,sp.nov.,ahuman intestinal mucin-degrading bacterium”一文提到的分離阿克曼氏菌的方法；再例如CN109355349A公開了一種阿克曼氏菌特異性篩選培養(yǎng)基以及篩選阿克曼氏菌的方法。傳統(tǒng)報(bào)道的分離Akk的方法，其樣品來源均為糞便，糞便中細(xì)菌基數(shù)較大，3％含量的Akk分離相對(duì)較為容易。而母乳本身細(xì)菌基數(shù)小，研究表明初乳樣本中每1ml的平均基因拷貝數(shù)log值為1.25，從母乳中分離Akk菌比從糞便中分離Akk菌難度大得多，將從糞便中分離Akk菌的方法應(yīng)用于母乳中Akk菌的分離根本難以成功。因此，目前尚無從母乳中分離Akk菌的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

基于以上技術(shù)問題，本發(fā)明的目的之一是提供一種從母乳中分離阿克曼氏菌的產(chǎn)品。采用該產(chǎn)品，能夠從母乳中成功分離出阿克曼氏菌。

本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種從母乳中分離阿克曼氏菌的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品包含富集培養(yǎng)基、分離培養(yǎng)基和樣本稀釋劑中的至少一種；