[發明專利]一種高產乙醇肺炎克雷伯菌噬菌體及其應用

有效

• 申請號: 202210120636.4
• 申請日: 2022-02-09
• 公開（公告）號: CN114381436B
• 公開（公告）日: 2023-06-02
• 發明（設計）人: 袁靜;甘霖;馮燕玲;崔晶花;閆超;薛冠華;馮俊霞;趙漢青;范政
• 申請（專利權）人: 首都兒科研究所
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A01N63/40;C11D3/38;A01P3/00;A01P1/00;A61K35/76;A61P1/16;A61P31/04;C12R1/92
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 韓蕾;姚亮

本發明公開了一種高產乙醇肺炎克雷伯菌噬菌體及其應用。具體而言，本發明提供了一種噬菌體，其保藏編號為CGMCC?No.23085。本發明還提供了所述的噬菌體在制備特異高效地裂解高產乙醇肺炎克雷伯菌的試劑中的應用。本發明噬菌體可在短時間內大量增殖，并對溫度和酸堿度具有良好的耐受性，可用于治療由HiAlc?Kpn引起的非酒精性脂肪肝。

技術領域

本發明是關于一種噬菌體及其應用，具體地說，是關于一種高產乙醇肺炎克雷伯菌噬菌體，以及該噬菌體在制備用于治療由高產乙醇肺炎克雷伯菌(high?alcohol-producing?Klebsiella?pneumoniae,HiAlc?Kpn)引起的非酒精性脂肪肝的藥物中的應用，屬于生物技術領域。

背景技術

腸道微生態菌群是一個復雜的環境，腸道菌群與機體的生理和代謝有著千絲萬縷的聯系。研究表明，當腸道菌群中存在高產乙醇的肺炎克雷伯菌時，其可在腸道中定植、持續產生乙醇，且產生的乙醇可在肝臟乙醇脫氫酶、過氧化氫酶和微粒體乙醇氧化系統等的作用下通過門靜脈進入肝臟，從而引發非酒精性脂肪肝。非酒精性脂肪肝目前已成為引起全球慢性肝病的首要原因，若未對脂肪肝及時進行治療，脂肪肝可逐漸發展為脂肪性肝炎、肝纖維化、肝硬化和肝細胞癌。

肺炎克雷伯菌屬于腸桿菌科克雷伯氏菌屬，是一種重要的條件致病菌和醫源性感染菌，常寄居于人體呼吸道和腸道中。因為近年來抗生素的不合理使用，肺炎克雷伯菌的耐藥情況日益嚴峻，抗生素治療的效果越來越不盡如人意。目前，肺炎克雷伯菌已被列入全球醫院抗生素耐藥危機的微生物名單，且其多重耐藥率呈逐年上升趨勢。

噬菌體治療是一種20世紀新興的利用噬菌體特異性抑制感染病原菌的方案。在耐藥情況日益嚴峻的形勢下，噬菌體治療再次受到全球研究者的關注。噬菌體廣泛分布于自然界中，是一種可以特異性侵染細菌的病毒，導致宿主菌代謝紊亂或者裂解死亡。噬菌體不僅可以在不破壞動植物細胞的情況下特異性殺傷細菌，還具有增殖快、易基因改造等特點。目前已有通過噬菌體治療多重耐藥細菌感染的多個成功案例。

盡管已有多種噬菌體制劑被用于預防控制細菌的感染，但目前尚未有針對HiAlcKpn的噬菌體的報道，治療由HiAlc?Kpn所致非酒精性脂肪肝的噬菌體治療方法尚處空白。

因此，如果能提供一種可以特異性裂解HiAlc?Kpn的噬菌體，將對于由HiAlc?Kpn所致非酒精性脂肪肝的治療具有重要意義。

發明內容

本發明的一個目的在于提供一種新的肺炎克雷伯菌噬菌體。

本發明的另一目的在于提供所述噬菌體的相關應用。

本案發明人在研究中發現一株裂解性高產乙醇肺炎克雷伯菌噬菌體，本發明中命名為phiTH1。本發明的噬菌體phiTH1已于2021年8月20日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所)，其保藏日期：2021年8月20日；分類命名為：克雷伯菌噬菌體，保藏編號為CGMCCNo.23085。本發明中亦稱該菌為噬菌體phiTH1。

本發明的噬菌體phiTH1屬有尾噬菌體，對溫度和酸堿度的耐受性良好，可在溫度4-40℃和pH?5-10的條件下保持穩定效價。噬菌體與細菌的最佳感染復數(multiplicityof?infection,MOI)為0.001。并且，本發明的噬菌體phiTH1的潛伏期在0-20分鐘，爆發期在20-80分鐘，隨后進入穩定期。本發明的噬菌體可以裂解HiAlc?Kpn菌株，特別是對于HiAlcKpn菌株W14(保藏編號為CGMCC?No.12540，Genebank號為GCA_001676825.1，為現有技術中的一株HiAlc?Kpn菌株)。本發明的噬菌體phiTH1在感染復數為10到0.0001的范圍內均可有效抑制高產乙醇肺炎克雷伯菌的生長，可為開發治療由HiAlc?Kpn所致非酒精性脂肪肝的抗生素替代療法奠定基礎。

具體而言，一方面，本發明提供了一種噬菌體，其保藏編號為CGMCC?No.23085。