[發明專利]一種呼吸道合胞病毒的全人源單克隆抗體及其應用

在審

• 申請號: 202210113540.5
• 申請日: 2022-01-30
• 公開（公告）號: CN116514960A
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發明（設計）人: 高福;王奇慧;戴連攀;崔慶為;尚桂軍;馬東禮;麻曉鵬;尚子方
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所;山西高等創新研究院;深圳市兒童醫院
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C07K16/46;C12N15/13;A61K39/42;A61K47/68;A61P31/14;G01N33/569
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 張瑩

本文提供了結合呼吸道合胞病毒(RSV)F蛋白的人源抗體(hAb)或其抗原結合片段。本文還提供了該人源抗體(hAb)或其抗原結合片段在防治及檢測RSV感染方面的用途。

技術領域

本文涉及結合呼吸道合胞病毒(RSV)F蛋白的人源抗體(hAb)或其抗原結合片段。本文還涉及該抗體或其抗原結合片段在防治及檢測RSV感染方面的用途。

背景技術

呼吸道合胞病毒(RSV)是常見的呼吸道感染病原體。免疫力低下人群，包括老年人及嬰幼兒為主要易感人群。它是世界上嬰兒住院的主要原因，也是僅次于瘧疾的嬰兒死亡的第二大原因。RSV是一種絲狀包膜、反義、單鏈RNA病毒，隸屬于單核病毒目(Mononegavirales)、肺炎病毒科、正肺病毒屬。這個家族還包括人偏肺病毒(hMPV)，它屬于偏肺病毒屬，和RSV一樣，是感染兒童的主要病原體。RSV和hMPV感染的癥狀很難區分，雖然它們可以通過霧化飛沫傳播，但它們通常都是通過密切接觸傳播的。在鼻咽和上呼吸道的上皮細胞復制一段短時間后，呼吸道合胞病毒感染可能會擴散到下呼吸道的小細支氣管或肺泡。宿主對RSV感染的免疫反應增加了粘液的產生和炎癥，導致氣道變窄，導致幼兒患支氣管炎。

RSV基因組全長15.2kb，包含10個基因，編碼11個蛋白。RSV病毒粒子含有一個脂質雙層，表達有融合蛋白(F)、附著蛋白(G)和小分子疏水蛋白(SH)。F和G蛋白比SH蛋白要豐富得多，SH蛋白是一種五聚體離子通道，被認為與延緩感染細胞的凋亡有關。其中，F蛋白(I型整合膜融合蛋白)在介導RSV病毒與宿主細胞膜的融合以及致病過程中起關鍵作用。F蛋白呈現兩種不同的構象，一種是“棒棒糖”形狀的預融合(pre-F)狀態，在病毒與細胞相互作用之前存在于病毒表面；另一種是“拐杖狀”的融合后狀態(post-F)，它是在病毒與細胞膜融合后獲得的，或者是由未知的機制自發地從高度穩定的pre-F重排到能量有利的post-F構象。這兩種形式在抗原性上是截然不同的，都被認為是潛在的候選疫苗。然而，前一種形式已被證明能在自然感染或免疫后誘導大多數高度中和抗體，使其成為疫苗開發的首選抗原。事實上，F蛋白免疫原性最強的兩個位點，命名為位點和位點V，只存在于pre-F構象上，而免疫原性較低的位點(位點I、位點II、位點III和位點IV)在該抗原的pre-F形式和post-F形式之間共享。

最早用于預防RSV感染的是Medimmune開發的RespiGam，這是一種混合人靜脈免疫球蛋白(IVIG)，含有高濃度的RSV保護性抗體。它在高危嬰兒中預防由RSV感染導致的嚴重下呼吸道感染具有明顯的療效。隨著Palivizumab(Synagis)的推出，Medimmune于2003年自愿停止使用RespiGam。Palivizumab是一種能與RSV?F蛋白結合的人源的鼠源性單克隆抗體。它也是第一個、也是唯一被批準用于人類治療的抗病毒單克隆抗體。對于妊娠小于32周的高危早產兒在出院后前6個月內，palivizumab預防可以有效地減少RSV住院時間。這一批準為被動免疫預防提供了概念證明。但因其成本和效果有限，與RespiGam一樣，目前也僅被批準用于早產兒和出生時患有心肺疾病的嬰兒預防RSV。

開發可供所有新生兒注射的更有效的RSV抗體，將有利于直接保護這一脆弱群體免受RSV感染。因此，篩選廣譜高中和活性的RSV抗體，對于臨床預防RSV疾病具有重要的現實意義。同時，通過生物結構功能分析抗體與RSV?F蛋白結合的保守表位，對于亞單位疫苗的設計及開發也具有潛在的指導作用。

發明內容

一方面，本文提供了結合呼吸道合胞病毒F蛋白的人源抗體或其抗原結合片段，所述人源抗體包括重鏈可變區和輕鏈可變區，其中所述重鏈可變區包含SEQ?ID?NO:2或4所示的重鏈可變區包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3，所述輕鏈可變區包含SEQ?ID?NO:3所示的輕鏈可變區包含的LCDR1，LCDR2和LCDR3；優選地，按照IMGT編號系統，所述重鏈可變區的HCDR1、HCDR2和HCDR3選自如下組合之一：

(1)HCDR1的氨基酸序列為:GFLFSSYS(SEQ?ID?NO：10)；