[發明專利]一株高產FK228的工程菌株及其構建與應用

有效

• 申請號: 202210109315.4
• 申請日: 2022-01-28
• 公開（公告）號: CN114410560B
• 公開（公告）日: 2023-09-15
• 發明（設計）人: 李瑞娟;宮愷;王茂芹;宋超逸;張友明;符軍;李愛英
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/52;C12N15/74;C12P17/18;C12R1/01
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 李健康

1.一株高產組蛋白去乙酰化酶抑制劑FK228的工程菌株，其特征在于：該工程菌株命名為工程菌株E264Δtdp::R-tdp-dep，其基因型為：Burkholderia?thailandensis?E264Δtdp、阿泊拉霉素抗性基因、tdpR、tdpA、tdpB、tdpC1、tdp-depDE、tdpF、tdpG、tdpH、tdpI和tdpJ，是利用敲除了thailandepsin的生物合成基因簇并在相應位置添加了attB位點構建的底盤菌Burkholderia?thailandensis?E264Δtdp為出發菌株，通過位點特異性重組將FK228的基因簇R-tdp-dep整合到底盤菌Burkholderia?thailandensis?E264Δtdp原本thailandepsin的生物合成基因簇的位置獲得。

2.權利要求1所述高產組蛋白去乙酰化酶抑制劑FK228的工程菌株的構建方法，步驟是：

(1)利用同源重組系統ETh1h2e_YI23對Burkholderia?thailandensis?E264中thailandepsin的生物合成基因簇進行敲除；

(2)利用PheS反向篩選結合同源重組技術，將attB位點放置在thailandepsin的生物合成基因簇敲除的位置，構建得到底盤菌，命名為Burkholderia?thailandensis?E264Δtdp；

(3)在構建的質粒p15A-cm-R-tdp-dep中插入位點特異性重組元件，構建得到表達質粒，命名為p15A-apra-phiC31-R-tdp-dep；

(4)將表達質粒p15A-apra-phiC31-R-tdp-dep電轉至E.coli?WM3064中，然后與底盤菌Burkholderia?thailandensis?E264Δtdp進行結合轉移，最終將FK228的基因簇R-tdp-dep整合到宿主染色體上，得到能高產組蛋白去乙酰化酶抑制劑FK228的工程菌株，該工程菌株命名為工程菌株E264Δtdp::R-tdp-dep。

3.權利要求1所述高產組蛋白去乙酰化酶抑制劑FK228的工程菌株在發酵制備FK228中的應用。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于：

發酵制備FK228的方法是：將工程菌株E264Δtdp::R-tdp-dep二級種子按體積比1-5％接種量接入裝液量為65mL發酵培養基的250mL搖瓶中，在28±1℃、180±20r·min^-1的條件下培養56±2h；得到含FK228的發酵液；

所述含FK228的發酵液的分離方法是：利用等體積的乙酸乙酯對含FK228的發酵液進行萃取，重復3±1次，合并萃取液，低壓濃縮干燥獲得FK228粗提物。