[發明專利]一種檢測雞金銀羽位點基因型的引物對、試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 202210105893.0
• 申請日: 2022-01-28
• 公開（公告）號: CN114395632A
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發明（設計）人: 樊寶良;倪慧勇;王學靜;王志永;崔夢笛;謝建國
• 申請（專利權）人: 河北農業大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/683;C12N15/11
• 代理公司: 河北國維致遠知識產權代理有限公司 13137
• 代理人: 任青

1.一種檢測雞金銀羽位點基因型的引物對，其特征在于，包括由SEQ ID NO.1所示的上游引物和SEQ ID NO.2所示的下游引物。

2.一種檢測雞金銀羽位點基因型的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括上述由SEQID NO.1所示的上游引物和SEQ ID NO.2所示的下游引物組成的引物對。

3.根據權利要求2所述的檢測雞金銀羽位點基因型的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括Easy Taq DNA聚合酶、Easy Taq DNA聚合酶反應緩沖液、dNTPS、BspHI限制性內切酶及其反應緩沖液。

4.一種檢測雞金銀羽位點基因型的方法，其特征在于，用權利要求1所述的引物對通過PCR-RFLP方法對雞金銀羽位點基因型進行檢測。

5.根據權利要求4所述的檢測雞金銀羽位點基因型的方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

S1、以所述引物對進行PCR擴增，得到擴增片段；

S2、對擴增片段進行BspHI酶切，對酶切產物進行瓊脂糖凝膠電泳，根據瓊脂糖凝膠電泳結果判定雞金銀羽位點的基因型。

6.根據權利要求5所述的檢測雞金銀羽位點基因型的方法，其特征在于，所述PCR擴增的反應體系為：

擴增反應程序為：95℃預變性5min；95℃變性15s，62℃退火15s，72℃延伸15s，35個循環；72℃延伸7min；4℃保存。

7.根據權利要求5所述的檢測雞金銀羽位點基因型的方法，其特征在于，所述BspHI酶切的反應體系為：S1所得的所述擴增產物10μL，10×BspHI限制性內切酶反應緩沖液1.5μL，10U/μL BspHI限制性內切酶0.3μL，滅菌純水3.2μL。

8.根據權利要求7所述的檢測雞金銀羽位點基因型的方法，其特征在于，所述BspHI酶切的反應條件為：37℃，酶切過夜。

9.根據權利要求5所述的檢測雞金銀羽位點基因型的方法，其特征在于，S2中判定雞金羽位點的基因型的方法為：電泳只出現90bp、21bp條帶，個體羽色為白羽，該位點基因型公雞為SS型，母雞為S-半合子；電泳同時出現111bp、90bp和21bp條帶，個體羽色為白羽，性別為公雞，該位點基因型為Ss；電泳只出現111bp條帶，個體羽色為有色羽或白羽，該位點基因型公雞為ss，母雞為s-半合子。