[發明專利]一種用于阿爾茨海默癥早期檢測的芯片試劑盒

在審

• 申請號: 202210104495.7
• 申請日: 2022-01-28
• 公開（公告）號: CN114441771A
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 李宜鴻;范華東;蔡挺;柳慧娜;雷雲
• 申請（專利權）人: 國科寧波生命與健康產業研究院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543
• 代理公司: 北京君恒知識產權代理有限公司 11466
• 代理人: 張強

本發明公開了一種用于阿爾茨海默癥早期檢測的芯片試劑盒，其微流控芯片包括PDMS層和玻璃層，微流控芯片上設置第一進口、第二進口、第三進口、第四進口、外泌體捕獲區、蛋白免疫磁珠混合區、特異蛋白捕獲區和出口；第一進口與外泌體捕獲區相通，外泌體捕獲區經蛋白免疫磁珠混合區與特異蛋白捕獲區相通，特異蛋白捕獲區與出口相通；第二進口通過對稱設置的微流道構成的內圈流道連通于第一進口和外泌體捕獲區之間，第三進口通過對稱設置的微流道構成的中圈流道連通于外泌體捕獲區和蛋白免疫磁珠混合區之間，第四進口通過對稱設置的微流道構成的外圈流道連通于蛋白免疫磁珠混合區和特異蛋白捕獲區之間。優點在于：檢測方便，檢測速度快。

技術領域

本發明涉及生物醫學技術領域，具體地說是一種用于阿爾茨海默癥早期檢測的芯片試劑盒。

背景技術

阿爾茨海默癥（AD）是一類慢性發展的中樞神經系統慢性病，也是目前造成人類主要死因但又缺乏特效治療方案的疾病。因此，在臨床中，早期篩查、診斷對AD的防治尤為重要。病理性生物標志物的確立是做到對AD患者早期診斷和篩查的前提，也是檢驗醫學中的熱門難題。數十年來，“Aβ瀑布假說”是AD發病機制中的最經典的理論之一，該理論解釋阿爾茨海默癥是由于Aβ在大腦皮層和海馬區大量沉積，出現后續的由磷酸化的tau蛋白介導的細胞內神經元纖維纏結，進而導致神經元凋亡，損傷影響患者的認知功能。根據美國國立老化研究院和阿爾茨海默癥協會（NIA-AA）最新的ATN診斷標準，明確將Aβ、總tau和磷酸化的tau蛋白的濃度變化作為診斷AD的重要標志，而目前上述生物標志物需要通過采集腦脊液進行檢測。腦脊液雖然能夠較好的反映腦內的代謝情況，但是獲取腦脊液需要侵入性腰穿，其有創性和高成本導致無法大規模和重復取樣，因此無法進行長期監測。相對于腦脊液，血液樣本獲取便利，而且創傷性小，在短時間內可多次采血，患者的接受度較高，然而血液中AD標志物由于其含量極低且特異性不高，檢測難度較大。

外泌體是一種由細胞分泌的胞外囊泡，作為胞間信使在細胞間的通訊中扮演著重要角色。神經退行性病如朊蛋白病、帕金森病等病的相關致病蛋白都可以通過外泌體釋放到細胞外。有研究證實AD相關病理蛋白（Aβ、tau）是通過外泌體進行運輸的，意味著從血液里提取的外泌體中的Aβ和tau蛋白可以替代從腦脊液提取從而診斷AD。而如何將可作為AD新型生物標志物的外泌體快速精確的分離出來是需要解決的一個關鍵問題。

常規的外泌體分離方法有高速離心、共沉淀以及免疫親和等，這些方法雖然能夠很好的分離外泌體，但其缺點在于時間長、費用高等。而對比這些常規的外泌體分離方法，微流控芯片作為一種新型技術在外泌體的分離領域展現出巨大的優勢：高速、高通量、自動化、集成和便捷等。不僅如此，微流控芯片還可以將外泌體的分離及分析集成在一張芯片上，具有高效、便捷以及高靈敏度等優點。盡管血液中AD的特征性病理蛋白（Aβ、tau）的濃度相對于腦脊液要低10-100倍，但是通過微流控芯片能將外周血來源的外泌體富集，達到濃縮Aβ、tau蛋白的目的，大大提高了AD生物標志物的可檢測濃度；對于微流控的蛋白檢測方式，目前常用的有熒光免疫技術（FIA）、磁敏免疫技術（MI）以及化學發光免疫技術（CLIA）。其中熒光免疫技術需要激發光，對儀器要求較高且測定對象有限。而磁敏免疫技術由于其芯片成本較高，測試通量有限也限制了它們的推廣。而化學發光免疫技術因其不需要激發光源、靈敏度高、信號穩定、線性范圍寬，非常適合于現場分析。

發明內容

本發明之目的是彌補上述之不足，向社會公開檢測方便，檢測速度快的一種用于阿爾茨海默癥早期檢測的芯片試劑盒。

本發明的技術方案是這樣實現的：

一種用于阿爾茨海默癥早期檢測的芯片試劑盒，包括有微流控芯片，所述的微流控芯片包括有PDMS層和玻璃層，所述的微流控芯片上設置有

一第一進口，用于輸入血漿與磁珠的混合液；

一第二進口，用于輸入清洗緩沖液、裂解液、洗脫液；

一第三進口，用于輸入Aβ或tau的免疫磁珠混合液、Aβ或tau的抗體、酶聯二抗；

一第四進口，用于輸入熒光酶底物；