[發明專利]一種基于M基因核苷酸片段刪除的流感病毒的致弱方法以及致弱流感病毒株和應用

在審

• 申請號: 202210100385.3
• 申請日: 2022-01-27
• 公開（公告）號: CN114410681A
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發明（設計）人: 陳瑞婷;毛水花;孫慧敏;周孟云;李曉雨;宋家升
• 申請（專利權）人: 浙江迪福潤絲生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/44;C12N7/01;A61K39/145;A61P31/16
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 朱玲艷

1.一種流感病毒的致弱方法，其特征在于，包括以下步驟：

刪除流感病毒M2部分基因序列，利用反向遺傳操作系統，拯救出致弱流感病毒株。

2.根據權利要求1所述的致弱方法，其特征在于，所述致弱方法的背景毒株包括A/Puerto Rico/8/1934。

3.根據權利要求1所述的致弱方法，其特征在于，所述刪除包括刪除流感病毒M基因第767位堿基到第877位堿基之間任意位置和長度的核苷酸序列。

4.根據權利要求1所述的致弱方法，其特征在于，所述刪除包括刪除M2以下基因序列之一：SEQ ID NO.1～6。

5.根據權利要求1所述的致弱方法，其特征在于，刪除流感病毒M2部分基因序列后的流感病毒M基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.7～12之一所示。

6.根據權利要求1所述的致弱方法，其特征在于，所述致弱方法包括以下步驟：制備含刪除流感病毒M2部分序列后的核苷酸的缺陷型M質粒；將所述缺陷型M質粒、流感病毒反向遺傳的其他7個質粒和表達蛋白的質粒共轉染細胞，收獲病毒，得到致弱流感病毒株；所述反向遺傳的其他7個質粒包括表達以下基因組片段的雙向表達質粒：PB2、PB1、PA、NP、NS、HA和NA；所述表達蛋白的質粒包括表達PR8-M2蛋白的質粒。

7.一組基于權利要求1～6任一項所述致弱方法制備得到的致弱流感病毒株。

8.根據權利要求7所述的致弱流感病毒株，其特征在于，所述致弱流感病毒株以A/Puerto Rico/8/1934為背景，刪除流感病毒M2部分基因序列。

9.一組用于制備致弱流感病毒株的含刪除流感病毒M2部分序列后的核苷酸的缺陷型M質粒，其特征在于，所述缺陷型M質粒含權利要求1～6任一項所述致弱方法中所述的刪除流感病毒M2部分序列后的核苷酸。

10.權利要求1～6任一項所述的致弱方法或權利要求7或8所述的致弱流感病毒株或權利要求9所述的缺陷型M質粒在制備流感致弱病毒疫苗株中的應用。