[發明專利]一種萃取小麥面筋蛋白酶解產物中苦味肽的方法

在審

• 申請號: 202210099508.6
• 申請日: 2022-01-27
• 公開（公告）號: CN114480542A
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 劉伯業;李娜娜;陳復生;孫小瑞;魏蕓錦;何顯鳳;李振源;田宇;宮瑞林
• 申請（專利權）人: 河南工業大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/14;C07K1/16;C07K1/22;C07K1/30;C07K1/36
• 代理公司: 鄭州銀河專利代理有限公司 41158
• 代理人: 姚小靜

1.一種萃取小麥面筋蛋白酶解產物中苦味肽的方法，其特征在于，包括如下步驟：將小麥面筋蛋白加入水中形成懸浮液，之后依次進行脫淀粉、酶解、高溫滅酶、乙醇分級萃取、大孔吸附樹脂脫鹽、葡聚糖凝膠柱分離純化處理，再收集各峰組分以4000 r/min~6000 r/min的轉速進行離心處理，并將收集的上清液進行冷凍干燥，獲得所述苦味肽；

所述酶解處理過程中采用的酶包括淀粉酶、堿性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶。

2.根據權利要求1所述的一種萃取小麥面筋蛋白酶解產物中苦味肽的方法，其特征在于，將小麥面筋蛋白與水按1:2~1:4的料液比在燒杯中攪拌均勻，升溫至50～60℃，加入0.5%~1.5%的α-淀粉酶，在夾層燒杯中調節pH為6.0~7.0，反應0.5~1.5 h，冷卻至室溫，4000r/min~6000 r/min離心10~30 min，除去上清液，然后取出沉降下來的蛋白質，冷凍干燥后備用。

3.根據權利要求1所述的一種萃取小麥面筋蛋白酶解產物中苦味肽的方法，其特征在于，所述酶解處理包括：向所述懸浮液內加水至料液比為1:15～25，待溫度為50～55℃時，加入一種市售較為常見的食品級蛋白酶（堿性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶或木瓜蛋白酶），在恒溫條件下維持反應體系的pH值7.0～8.0，酶解15～600 min，之后于90~95℃條件下，滅酶10～20 min。

4.根據權利要求1所述的一種萃取小麥面筋蛋白酶解產物中苦味肽的方法，其特征在于，所述離心處理包括：以4000～5500 r/min的轉速離心15~20 min，之后收集所述的上清液，為所述苦味肽粗液，然后通過感官評定確定各苦味肽組分的苦味值。

5.根據權利要求1或3所述的一種萃取小麥面筋蛋白酶解產物中苦味肽的方法，其特征在于，所述堿性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶與小麥面筋蛋白的底物比（E/S）為1:20～1:100。

6.根據權利要求1所述的一種萃取小麥面筋蛋白酶解產物中苦味肽的方法，其特征在于，所述乙醇分級萃取處理包括：將經酶解處理后的酶解液冷凍干燥后加入水中形成懸浮液，調整固形物含量為15~25%，加入食品級無水乙醇使乙醇的最終濃度為15~25 %，保持溫度為25~35℃，水浴震蕩20~40 min，以4000～5500 r/min的轉速離心15~20 min，并向收集的上清液中加入無水乙醇，使乙醇的最終濃度為35~45%，同等條件下水浴震蕩、離心，以此類推，在上清液中繼續加入無水乙醇，重復操作二次，當上清液中乙醇最終濃度為75~85%時，經水浴震蕩、離心后，除去多余的乙醇溶液，將剩余的上清溶液冷凍干燥后，獲得所述苦味肽。

7.根據權利要求1所述的一種萃取小麥面筋蛋白酶解產物中苦味肽的方法，其特征在于，所述大孔吸附樹脂其型號為DA201-C，樣品濃度為25~35 mg/mL，流速為1~2 mL/min，每次上樣量為25~35 mL。

8.根據權利要求1所述的一種萃取小麥面筋蛋白酶解產物中苦味肽的方法，其特征在于，所述葡聚糖其型號為G-25，樣品濃度為45~55 mg/mL，流速為1~2 mL/min，每次上樣量為1~3 mL。

9.根據權利要求1所述的一種萃取小麥面筋蛋白酶解產物中苦味肽的方法，其特征在于，通過HCl、NaOH等調節物料體系的酸堿度。

10.根據權利要求1所述的一種萃取小麥面筋蛋白酶解產物中苦味肽的方法，其特征在于，所述苦味肽的含量8%，苦味值3.5，苦味肽中疏水氨基酸所占的比例40%，苦味肽的疏水性300。