[發明專利]一種鏈霉親和素磁珠標記方法

有效

• 申請號: 202210097343.9
• 申請日: 2022-01-26
• 公開（公告）號: CN114544939B
• 公開（公告）日: 2022-09-20
• 發明（設計）人: 伍波;吳智廣;李超輝;董曉寧;鄒國英;李勇;李博;周學寶;秦曉燕;李悅
• 申請（專利權）人: 天津鴻宇泰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 北京維正專利代理有限公司 11508
• 代理人: 李愛民;相黎超

本申請涉及免疫檢測的技術領域，具體為一種鏈霉親和素磁珠標記方法。該方法包括如下步驟：先將惰性蛋白共價偶聯至磁珠表面，獲得偶聯有惰性蛋白的磁珠；再將所述偶聯有惰性蛋白的磁珠與鏈霉親和素偶聯，獲得鏈霉親和素標記磁珠。本申請提供的標記方法能夠提高鏈霉親和素標記磁珠的信號值，降低背景值，提高檢測結果的靈敏度。

技術領域

本申請涉及免疫檢測的技術領域，具體為一種鏈霉親和素磁珠標記方法。

背景技術

鏈霉親和素是由鏈霉菌分泌的一種蛋白質，它能與生物素發生特異性結合，它們之間的結合力是目前已知最強的非共價鍵結合力。因為這一特性，鏈霉親和素-生物素反應體系在純化和檢測領域得到了廣泛的應用。鏈霉親和素以同源四聚體的形式存在，每摩爾的四聚體分子可結合四摩爾的生物素分子，所以在免疫檢測領域具有信號放大作用。由于鏈霉親和素具有上述優勢，目前常被標記在磁珠上，用在磁珠化學發光技術中來捕獲生物素化抗體或抗原。

常見的鏈霉親和素的標記方法為先利用磁珠對鏈霉親和素進行標記，然后再用惰性蛋白對獲得的鏈霉親和素磁珠進行封閉。目前，用磁珠對鏈霉親和素的標記方式有兩種，一種是用羧基磁珠和鏈霉親和素進行標記，具體步驟為將羧基磁珠進行活化，配置鏈霉親和素溶液，將活化后的羧基磁珠和鏈霉親和素溶液進行包被反應獲得鏈霉親和素標記磁珠；另一種是用Tosyl官能團磁珠和鏈霉親和素進行標記，具體步驟為取Tosyl官能團的磁珠清洗重懸之后，再加入鏈霉親和素溶液和硫酸銨溶液進行包被反應，最終獲得鏈霉親和素磁珠。

上述鏈霉親和素的標記方法中，由于先在磁珠上進行了鏈霉親和素標記，在后續用惰性蛋白對鏈霉親和素磁珠進行封閉時，受磁珠表面上鏈霉親和素空間位阻的影響，惰性蛋白無法很好的對鏈霉親和素磁珠進行封閉，所以在使用過程中，鏈霉親和素磁珠會和生物素抗體、吖啶酯抗體等發生非特異性結合，導致非特異性背景升高，最終影響檢測結果。

發明內容

本申請提供一種鏈霉親和素磁珠的標記方法，能夠提高鏈霉親和素標記磁珠的信號值，降低背景值，提高檢測結果的靈敏度。

為了解決技術問題，采取了如下的技術方案：

一種鏈霉親和素磁珠標記方法，包括如下步驟：

先將惰性蛋白共價偶聯至磁珠表面，對磁珠進行封閉，獲得偶聯有惰性蛋白的磁珠；再將所述偶聯有惰性蛋白的磁珠與鏈霉親和素偶聯，獲得鏈霉親和素標記磁珠。

通過采用此技術方案，本申請通過先將磁珠與惰性蛋白封閉，再和鏈霉親和素偶聯，因此，在封閉過程中不涉及到鏈霉親和素，故利用惰性蛋白封閉磁珠的過程中不會受到鏈霉親和素空間位阻的影響，使得惰性蛋白對磁珠的封閉效果較好。而相關技術中采用先利用鏈霉親和素對磁珠標記，后用惰性蛋白對鏈霉親和素磁珠封閉的方法，當后用惰性蛋白封閉鏈霉親和素磁珠時，由于鏈霉親和素的存在，故封閉時會受到磁珠表面上鏈霉親和素空間位阻的影響，從而使得惰性蛋白對鏈霉親和素磁珠的標記效果差。本申請利用封閉效果較好的、偶聯有惰性蛋白的磁珠與鏈霉親和素偶聯，使得最終獲得的鏈霉親和素標記磁珠信號值高，背景值低，同時，還能夠提高結果的靈敏度。

優選的，在所述偶聯有惰性蛋白的磁珠與所述鏈霉親和素偶聯的過程中，用多功能雙向交聯劑對所述偶聯有惰性蛋白的磁珠上的惰性蛋白和所述鏈霉親和素進行修飾，獲得修飾后的偶聯有惰性蛋白的磁珠和修飾后的鏈霉親和素。

進一步地，所述用多功能雙向交聯劑對所述偶聯有惰性蛋白的磁珠上的惰性蛋白和所述鏈霉親和素進行修飾，是指用所述多功能雙向交聯劑對所述偶聯有惰性蛋白的磁珠上的惰性蛋白的氨基和所述鏈霉親和素的氨基進行修飾。