[發明專利]一種重組人生長激素及單克隆抗體制備方法

在審

• 申請號: 202210095773.7
• 申請日: 2022-01-26
• 公開（公告）號: CN114478766A
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 韋朝寶;熊露群;李建平;鄧珍琴
• 申請（專利權）人: 桂林英美特生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/26
• 分類號: C07K16/26;C07K14/61;C12N15/70;C07K19/00;C12P21/06;C07K1/22;G01N33/535;G01N33/577;C12R1/19
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 石燕妮

本發明涉及生物工程技術領域，具體涉及一種重組人生長激素及單克隆抗體制備方法，包括對hGH重組菌株進行發酵培養后進行收集與裂解，得到裂解液上清；對裂解液上清進行hGH融合蛋白純化，得到hGH融合蛋白；對hGH融合蛋白進行酶切及hGH純化，得到重組hGH蛋白；使用重組hGH蛋白進行小鼠免疫，得到免疫小鼠，對免疫小鼠的脾臟細胞和骨髓瘤細胞進行融合，得到融合細胞；對融合細胞中的單克隆細胞株進行篩選，得到篩選細胞；使用篩選細胞對小鼠進行腹水實驗，制備hGH單抗；使用辣根過氧化酶對hGH單抗進行標記，得到標記單抗；對HRP標記單抗與篩選細胞進行配對，得到hGH抗體組合，解決了現有的hGH蛋白的單克隆抗體的制備成本較高的問題。

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，尤其涉及一種重組人生長激素及單克隆抗體制備方法。

背景技術

人生長激素(hGH)是由191氨基酸殘基組成的分子量為22000道爾頓的單鏈球狀蛋白，由腦下垂體分泌出，經由下丘腦釋放,它最主要的生理作用是通過促進身體各組織、器官以及骨骼中受體細胞的蛋白質合成和脂肪的分解,進而促進人的代謝和生長發育。hGH刺激骨骺端軟骨細胞分化、增殖，刺激軟骨基質細胞增長，引起線性生長加速及骨骼變寬。hGH調節生長激素不足或成人的脂肪、骨代謝、心腎功能，改善運動能力和生活質量。

目前，hGH蛋白的來源主要是早期從尸體的腦垂體中分離純化得到，因該方法原料短缺，費事費力，故成本很高，從而增加了hGH蛋白的單克隆抗體的制備成本。

發明內容

本發明的目的在于提供一種重組人生長激素及單克隆抗體制備方法，旨在解決現有的hGH蛋白的單克隆抗體的制備成本較高的問題。

為實現上述目的，第一方面，本發明提供了一種重組人生長激素單克隆抗體的制備方法，包括以下步驟：

獲取hGH重組菌株，對所述hGH重組菌株進行發酵培養，得到發酵菌液；

對所述發酵菌液進行收集與裂解，得到裂解液上清；

對所述裂解液上清進行hGH融合蛋白純化，得到hGH融合蛋白；

對所述hGH融合蛋白進行酶切及hGH純化，得到重組hGH蛋白；

使用所述重組hGH蛋白進行小鼠免疫，得到免疫小鼠，對所述免疫小鼠的脾臟細胞和骨髓瘤細胞進行融合，得到融合細胞；

對所述融合細胞中的單克隆細胞株進行篩選，得到篩選細胞；

使用篩選細胞對小鼠進行腹水實驗，制備hGH單抗；

使用辣根過氧化酶對所述hGH單抗進行標記，得到標記單抗；

將所述HRP標記單抗與所述篩選細胞進行配對，得到hGH抗體組合。

其中，所述獲取hGH重組菌株，對所述hGH重組菌株進行發酵培養，得到發酵菌液的具體方式為：

獲取hGH重組菌株，將所述hGH重組菌株溶解，得到溶解菌液；

將所述溶解菌液中加入含有100ug/mL卡那霉素的5ml培養基中與卡那霉素混勻后培養12-14小時，得到第一種子液；

將所述第一種子液轉接至含有100ug/mL卡那霉素的50ml培養基中進行培養2-4h，當所述50ml培養基中的菌體濃度OD600上升至1.0時，得到第二種子液；

將所述第二種子液轉接至含有100ug/mL卡那霉素的1000ml培養基中進行培養1-2h，當所述1000ml培養基中的菌體濃度OD600上升至0.8時，得到第三種子液；

在所述第三種子液中滴加IPTG，直至所述第三種子液中的所述IPTG的濃度為0.5mM/L，得到第四種子液；