[發明專利]一種三倍體桉樹新品種“京桂一號桉”的組培快繁方法

在審

• 申請號: 202210095033.3
• 申請日: 2022-01-26
• 公開（公告）號: CN114586684A
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發明（設計）人: 邱炳發;唐再生;王建忠;蘭俊;熊濤;張磊;蔣興成;趙英偉;李霞;馬忠才;李麗芳;彭智邦;俸榮娣;劉金熾
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區國有東門林場
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南寧市吉昌知識產權代理事務所(普通合伙) 45125
• 代理人: 滕藝瓊

1.一種三倍體桉樹新品種“京桂一號桉”的組培快繁方法，其特征在于，包含以下操作步驟：

(1)優質外植體原材料培育：將三倍體桉樹“京桂一號桉”植株截去稍段，促使萌芽，移至大棚溫室培養，當萌芽長出后，人工常規控制光照、溫度、濕度，并采取病蟲害防治措施，當萌芽生長到6-8厘米，節上芽眼飽滿但尚未萌生側芽時采芽，去除葉片，得到外植體材料備用；

(2)外植體消毒：清洗步驟(1)得到的外植體材料，再用新潔爾滅菌液浸泡并清洗，在無菌條件下，剪切成長1.5-2.0厘米、保留有1-2個潛伏芽的半木質化切段，酒精浸泡，清洗，瀝干水液，置于次氯酸鈉溶液中消毒，清洗，吸干表面水分，置于升汞溶液中，讓外植體表面與升汞溶液充分接觸，隨后倒去升汞溶液，清洗外植體5-6次；

(3)初代培養：將步驟(2)消毒好的外植體表面水分吸干，切去兩端留存長1.0-1.5厘米莖段接種到初代培養基JG1上，接種后全暗培養8-10天，萌芽后移至光照培養，光照時間10-12h/d；

(4)繼代培養：經初代培養的外植體萌芽后，側芽形成叢生芽，培養15-20天，選取生長健壯、無污染的無菌芽，切割后轉入到繼代培養基JG2上，光照時間10-12h/d；在光照強度2000-2500Lux條件下培養18-22天，將長成2.0-2.5cm的無菌芽，切成帶莖節的切段，將芽叢切分成小芽叢，轉入到新的繼代培養基，以促進叢生芽增殖和單芽伸長，然后如此反復繼代培養，無菌芽數量不斷增多；

(5)生根培養：從步驟(4)擴繁的繼代苗切取生長健壯的芽條，插入到生根培養基JG3中培養，培養后的第7-9天的光照強度為1000Lux，當有短根從切口處冒出時，提高光照至3000Lux，培養溫度26-35℃；培養25-35天，根長1.5-2.0cm，苗高2.5-3.0cm時，煉苗；

(6)煉苗：將預移栽的苗，增強光照至5000Lux以上，提高苗木光合作用，增強自養能力，促進苗木木質化；臨移栽前3-5天，降低瓶內濕度，增強苗木對自然環境的適應能力，同時，灌注水入瓶；

(7)移栽：取出經煉苗的生根瓶苗，移栽至經消毒的黃心蛭土石基質或輕型基質中培養，培養20-25天；

(8)壯苗培養：按照苗木的高度及地徑大小進行分級，當苗長至15-20cm，地徑為2.4-2.7mm時，轉移至苗間距更大的育苗托中培養；苗木密度由625株/m²降至356株/m²，擴大光照空間，苗高12-15cm，地徑2.1-2.3mm的小苗留在原育苗托中；并及時淘汰少量長勢較弱的苗木，全光照自然狀態下，培養40-60天，苗高25-30cm時，出圃造林；

上述三倍體桉樹“京桂一號桉”的組培快繁方法步驟(3)中，所述初代培養基JG1組成為：以MS培養基為基礎，對其改良，所述的改良為調整大量元素氮磷鉀的含量質量比為8:1:13，其中大量元素中KH₂PO₄濃度調整為270mg/L，形成適合“京桂一號桉”生長的專用基礎培養基，再添加N⁶芐基腺嘌呤(6-BA)1.0mg/L+KT 0.5mg/L+NAA0.5mg/L+維生素C 2.0mg/L+核黃素7.0mg/L，以白糖30g/L作為碳源，瓊脂粉3.75g/L作支撐物，pH值調整為5.8-6.0，即為初代培養基JG1；

上述三倍體桉樹“京桂一號桉”的組培快繁方法步驟(4)中，所述繼代培養基JG2為：在JG1的基礎上，提高大量元素中的氮磷鉀元素含量，氮、磷、鉀元素分別提高質量百分數17.3％、10.0％、19.0％，形成適合三倍體桉樹“京桂一號桉”繼代增殖專用基礎培養基；再添加N⁶芐基腺嘌呤(6-BA)0.5mg/L+NAA0.2mg/L+維生素C 2.0mg/L+核黃素7.0mg/L；以白糖30g/L作為碳源，瓊脂粉3.75g/L作支撐物，pH值調整為5.8-6.0，即為繼代培養基JG2；

上述三倍體桉樹“京桂一號桉”的組培快繁方法步驟(5)中，所述的生根培養基JG3為：1/3MS培養基結合H培養基，添加H培養基中的生物素0.05mg/L、煙酸0.5mg/L，并去掉抑制生根的離子NH₄⁺，形成“京桂一號桉”專用的生根基礎培養基，再添加植物生長調節劑ABT₁1.2mg/L+IBA0.2mg/L+IAA0.1mg/L+1.2％氨基寡糖素，以白糖15g/L作碳源，瓊脂粉4.0g/L作支撐物，pH值調整為6.0-6.2，即為生根培養基JG3。