[發明專利]萘乙酸單克隆抗體、雜交瘤細胞株及應用

在審

• 申請號: 202210088651.5
• 申請日: 2022-01-25
• 公開（公告）號: CN114317452A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 胥傳來;周健;匡華;徐麗廣;孫茂忠;吳曉玲;劉麗強;郝昌龍;宋珊珊;郭玲玲;胥欣欣;倪萍;畢雪威;郭鵬飛
• 申請（專利權）人: 無錫迪騰敏生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/44;G01N33/577;G01N33/543
• 代理公司: 無錫承果知識產權代理有限公司 32373
• 代理人: 劉清麗

本發明提供萘乙酸單克隆抗體、雜交瘤細胞株及應用，屬于食品安全免疫檢測領域。雜交瘤細胞株的保藏編號為：CGMCC No.45024。本發明先合成萘乙酸完全抗原，使用弗氏佐劑混合乳化，注射免疫BALB/c小鼠。篩選出高效價，低IC₅₀的小鼠脾細胞，通過PEG法與小鼠骨髓瘤細胞融合，選擇性培養基，篩選出兩種細胞融合后的雜交瘤細胞；再經過間接競爭酶聯免疫法篩選細胞并多次亞克隆，得到單克隆抗體雜交瘤細胞株。此細胞株分泌的單克隆抗體，對萘乙酸具有較好的檢測靈敏度，對萘乙酸的50％抑制濃度IC50為6.77ng/mL，用于免疫檢測試劑盒以及膠體金試紙條，為植物源性食品中添加萘乙酸的檢測提供有力的檢測手段。

技術領域

本發明屬于食品安全免疫檢測領域，具體涉及萘乙酸單克隆抗體、雜交瘤細胞株及應用。

背景技術

萘乙酸是一種有機化合物，不溶于水，但微溶于熱水，且在潮濕環境中易分解。具有生長素類活性，由根、莖、葉吸收。萘乙酸廣泛用于農業、林業、蔬菜、花卉、果樹等領域，誘發不定根形成，提高樹木扦插成活率；提高座果率，防止采前落果。但其屬于毒害品，對粘膜、上呼吸道、眼、皮膚等組織有極強的損壞作用。萘乙酸在作物生產和植物栽培種有著廣闊的發展前景，給人類帶來巨大的經濟和社會效益，引起了人們極大的關注。

萘乙酸的常規檢測方法包括高效液相色譜串聯質譜，超高效液相色譜，超高效液相色譜-串聯質譜和氣相色譜串聯質譜等人。這些方法在不同程度上存在一些缺陷：耗時，昂貴的儀器和大量的樣品預處理程序等。因此，這些方法不適合現場進行高通量分析地萘乙酸的檢測。因此需要分析系統，這意味著這些方法在現場分析中的應用受到限制。

而免疫分析方法具有低成本、高通量、高靈敏、對技術人員相對要求低等特點，因此適用于大量樣品的快速篩查。

發明內容

為解決相關技術中存在的問題，本發明提供一種分泌萘乙酸單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其應用，由該細胞株制備的單克隆抗體對萘乙酸具有較好的親和力和檢測靈敏度，可以用來建立萘乙酸酶聯免疫檢測方法，或建立膠體金免疫層析試紙條快速檢測方法，為間接競爭ELISA試劑盒以及膠體金試紙條的研發推廣奠定了基礎。

一方面，本發明提供一株分泌萘乙酸單克隆抗體的雜交瘤細胞株，已于2021 年12月15日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏名稱為單克隆細胞株HLH，保藏編號CGMCC No.45024，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號。

本發明還提供一種萘乙酸單克隆抗體，其是由保藏編號為CGMCC No.45024 的分泌萘乙酸單克隆抗體的雜交瘤細胞株分泌產生。

又一方面，提供一種萘乙酸單克隆抗體的制備方法，包括：取BALB/c小鼠，腹腔注射石蠟油，再腹腔注射保藏編號為CGMCC No.45024的雜交瘤細胞株，注射后收集腹水，將腹水純化，將獲得的萘乙酸單克隆抗體低溫保存。

又一方面，提供一種所述萘乙酸單克隆抗體的應用，用于食品中萘乙酸殘留的檢測。

又一方面，提供一種分泌萘乙酸單克隆抗體的雜交瘤細胞株的應用，用于制備萘乙酸單克隆抗體

再一方面，提供一種分泌萘乙酸單克隆抗體的雜交瘤細胞株的應用，應用于檢測萘乙酸。

進一步地，應用于食品中萘乙酸殘留的檢測。

另一方面，提供一種試劑盒，含有所述萘乙酸單克隆抗體。

又一方面，所述試劑盒應用于食品中萘乙酸殘留的檢測。

又一方面，提供一種膠體金試紙條，含有所述的萘乙酸單克隆抗體。

又一方面，所述膠體金試紙條應用于食品中萘乙酸殘留的檢測。

本發明提供的細胞株HLH的制備基本步驟為：